發(fā)布時間：2024-01-15 15:02:13
序言：寫作是分享個人見解和探索未知領(lǐng)域的橋梁，我們?yōu)槟x了8篇的免疫學(xué)分析方法樣本，期待這些樣本能夠?yàn)槟峁┴S富的參考和啟發(fā)，請盡情閱讀。
【摘要】目的 評價貝克曼全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測甲狀腺激素的效果。方法 測定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,分別計(jì)算批內(nèi)精密度、批間精密度、回收率和線性范圍。結(jié)果 T3、T4、FT3、FT4、TSH的批內(nèi)精密度分別為4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%,批間精密度分別為6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%,回收率分別為96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%,線性范圍分別為0.15～12.3 nmol/L、3.9～387.0 nmol/L、0.3～30.8 pmol/L、1.3～155.0 pmol/L、0.01～150.0 mIU/L。結(jié)論 貝克曼全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)測定甲狀腺功能具有重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高、可報告范圍寬、測定速度快等優(yōu)點(diǎn),適合于臨床應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】化學(xué)發(fā)光免疫分析法;甲狀腺激素
化學(xué)發(fā)光免疫分析法是20世紀(jì)80年代以來發(fā)展起來的一項(xiàng)新的標(biāo)記免疫技術(shù),在臨床上有廣泛的應(yīng)用,包括內(nèi)分泌激素、腫瘤標(biāo)志物、血藥濃度、傳染病、心血管疾病標(biāo)志物、貧血及過敏原等,特別是在甲狀腺激素檢測中應(yīng)用更為廣泛[1]。本文采用貝克曼全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測T3、T4、FT3、FT4、TSH,對其方法學(xué)進(jìn)行綜合評價。
1 材料與方法
1.1 儀器貝克曼全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。
1.2 試劑發(fā)光試劑、質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品由貝克曼公司提供。
1.3 血清來源試驗(yàn)所需血清樣本采自本院門診和住院患者,每例取3ml血,離心3000 r/min,10分鐘,取血清-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.4 檢測方法利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)和磁性微粒分離技術(shù)相結(jié)合的測定方法,其反應(yīng)原理與放免和酶免中的雙抗夾心法、競爭法相似,嚴(yán)格按試劑盒操作說明書操作。
1.5 評價指標(biāo)
1.5.1 批內(nèi)精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三種濃度的血清樣本,每種濃度同批平行測定10次,計(jì)算平均變異系數(shù)(CV)。
1.5.2 批間精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三種濃度的血清樣本各10份,每天各測定1次,共測定10天,計(jì)算平均變異系數(shù)(CV)。
1.5.3回收率:由貝克曼公司提供原裝3個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,分別測定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,每個濃度平行測定3次,計(jì)算平均回收率。
1.5.4 線性范圍收集患者血清標(biāo)本,取T3、T4、FT3、FT4、TSH濃度高于廠家提供線性范圍上限作為高值濃度水平(H),廠家提供稀釋液作為低值濃度水平(L),用稀釋液稀釋高值濃度血清,形成如下系列濃度檢測標(biāo)本:1H+0L、4H+1L、3H+2L、2H+2L、2H+3L、1H+4L、0H+1L。用配制成的系列濃度標(biāo)本平行測定各項(xiàng)指標(biāo)含量,取平均值作圖,取在坐標(biāo)紙上呈明顯直線趨勢的各點(diǎn)值進(jìn)行直線回歸統(tǒng)計(jì),取回歸系數(shù)r大于0.9的濃度范圍為可報告的濃度線性范圍。
2 結(jié) 果
2.1 批內(nèi)精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均變異系數(shù)分別為4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%。
2.2批間精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均變異系數(shù)分別為6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%。
2.3 回收率T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均回收率分別為96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%。
2.4 線性范圍T3所測結(jié)果得到回歸方程為y=1.069x-0.2468,r=0.9966,截距經(jīng)t檢驗(yàn),ta=1.36,0.95,截距經(jīng)t檢驗(yàn),ta=0.36,
3 討 論
血清中三碘甲狀原腺氨酸(T3)、四碘甲狀原腺氨酸(T4)、游離三碘甲狀原腺氨酸(FT3)、游離四碘甲狀原腺氨酸(FT4)、促甲狀腺激素(TSH)的測定對甲狀腺疾病的診斷具有重要價值。以往國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室多采用RIA、MIRA檢測血清甲狀腺激素水平,此法雖較準(zhǔn)確,儀器與試劑也較為低廉,但對操作人員水平要求較高,對實(shí)驗(yàn)條件及環(huán)境有較多要求,且隨著標(biāo)記抗原的放射性衰減,而使計(jì)數(shù)不穩(wěn)定及曲線失真,導(dǎo)致結(jié)果偏離,結(jié)果重復(fù)性差,且可產(chǎn)生放射性污染[2,4]。
近年來發(fā)展起來的全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)是利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)和磁性微粒分離技術(shù)相結(jié)合的測定方法,其反應(yīng)原理與放免和酶免中的雙抗體夾心法、競爭法相似。其優(yōu)點(diǎn)是[3,5]:(1)成熟的單克隆抗體技術(shù)或獨(dú)特的磁性微粒子技術(shù),保證了反應(yīng)的高特異性;(2)檢測范圍寬,具有良好的稀釋線性;(3)試劑穩(wěn)定性好,不需酶促反應(yīng),有效期可長達(dá)半年;(4)操作簡便,分析過程采用全自動化,減少了人工操作誤差,重復(fù)性好;(5)試劑及標(biāo)本均采用無吸附材料,故相互間的交叉污染率低,干擾因素少;(6)真正的隨機(jī)連續(xù)檢測,樣本隨到隨測,具有急診優(yōu)先插入功能。因此全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)是目前檢測甲狀腺激素等指標(biāo)的較好方法。
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【關(guān)鍵詞】 臨床免疫學(xué)； 免疫檢驗(yàn)； 實(shí)踐； 探索
臨床免疫學(xué)是免疫學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)的重要連接環(huán)節(jié)。免疫學(xué)檢驗(yàn)是以免疫學(xué)原理為基礎(chǔ)，利用各種具有敏感特性的標(biāo)記技術(shù)，對各種病理和生理的免疫學(xué)指標(biāo)行特異性、超微量地分析，包括細(xì)胞的、體液的診治及預(yù)后評估[1]。就免疫學(xué)檢驗(yàn)進(jìn)行準(zhǔn)確定位，是臨床醫(yī)生依據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果對疾病進(jìn)行診治和防控的有效技術(shù)手段，具有非常重要的研究價值。本文就臨床免疫學(xué)和免疫檢驗(yàn)的相關(guān)實(shí)施與探索進(jìn)行綜述如下。
1 臨床免疫學(xué)概念
臨床免疫學(xué)屬重要的免疫學(xué)分支部分，為免疫學(xué)應(yīng)用到臨床醫(yī)學(xué)的途徑。免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展和進(jìn)步與臨床免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展進(jìn)步有著密切相關(guān)性，為臨床及時、科學(xué)的應(yīng)用免疫學(xué)新技術(shù)，在疾病的治療、監(jiān)測、確診、預(yù)后中均發(fā)揮重要的引導(dǎo)及參考作用[2]。隨著醫(yī)療科技的不斷進(jìn)步，臨床上多種免疫學(xué)技術(shù)已被普遍開展應(yīng)用，如流式細(xì)胞式和免疫細(xì)胞檢測及分類技術(shù)、血清蛋白電泳技術(shù)及各種肽類物質(zhì)、激素、細(xì)胞因子、腫瘤標(biāo)志的檢測技術(shù)等[3]。隨著目前檢驗(yàn)項(xiàng)目在臨床的不斷增多，臨床醫(yī)務(wù)人員及患者自身都對臨床檢驗(yàn)有更高的期待和要求，各種免疫學(xué)技術(shù)均需緊跟醫(yī)療科技發(fā)展步伐，更全面、迅速的發(fā)展，以盡快的與臨床應(yīng)用適宜，進(jìn)而開展臨床免疫學(xué)技術(shù)的嶄新局面。
2 臨床免疫學(xué)促進(jìn)新技術(shù)發(fā)展
技術(shù)的產(chǎn)生、發(fā)展和創(chuàng)新基礎(chǔ)均需有相應(yīng)的理論，如PCR技術(shù)、分子克隆技術(shù)等均為遺傳學(xué)或分子生物學(xué)重要的具有劃時代意義的技術(shù)。而這些技巧中，理論基礎(chǔ)為DNA的雙螺旋。同時免疫學(xué)的抗體理論與抗原對多種臨床免疫學(xué)新技術(shù)的產(chǎn)生也起到了推動作用，如標(biāo)記技術(shù)、沉淀、凝集等的發(fā)展進(jìn)展[4]。近年來，受細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)的不斷滲透及免疫學(xué)的飛速積習(xí)難改展，使免疫學(xué)在理論上獲得了較大的突破。
3 臨床免疫學(xué)新技術(shù)發(fā)展特點(diǎn)分析
3.1 多學(xué)科交融 臨床免疫學(xué)經(jīng)典技術(shù)包括免疫標(biāo)記技術(shù)、溶血技術(shù)、中和技術(shù)、沉淀技術(shù)、凝集技術(shù)等。以上技術(shù)為臨床免疫學(xué)基礎(chǔ)，在臨床免疫學(xué)傳統(tǒng)及現(xiàn)代的理論中均占有較重要的地位。以上技術(shù)或其基礎(chǔ)上發(fā)展創(chuàng)新的技術(shù)至今仍在科學(xué)研究和臨床檢驗(yàn)中廣泛應(yīng)用。但生命科學(xué)在不斷發(fā)展，不同學(xué)科間漸較難明確區(qū)分和界定，形成廣泛的滲透和交叉的局面，而遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的適體技術(shù)、分子雜交技術(shù)、PCR技術(shù)、染色質(zhì)沉淀技術(shù)等免疫學(xué)新技術(shù)，使免疫應(yīng)用范圍和理論不斷拓展。另外，臨床免疫檢驗(yàn)中，組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)中的顯微鏡技術(shù)也為一項(xiàng)重要的技術(shù)手段。如由普通顯微鏡與免疫組織化學(xué)技術(shù)聯(lián)合對抗原進(jìn)行檢測，自身抗體采用熒光顯微鏡與熒光標(biāo)記技術(shù)聯(lián)合進(jìn)行檢測。且電子顯微鏡對細(xì)胞間的相互作用和免疫細(xì)胞的行為可直接行動態(tài)觀察。以上技術(shù)的應(yīng)用，使臨床免疫學(xué)技術(shù)得到了較大豐富，為發(fā)展提供了動力及方向[5]。同時免疫學(xué)檢測數(shù)據(jù)顯著多，用日益復(fù)雜，有效分析數(shù)據(jù)和正確應(yīng)用結(jié)果顯得較為重要故臨床免疫學(xué)與生物信息學(xué)、醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)等學(xué)科的合作與交流也漸趨深入。
3.2 高通量、智能化、自動化的免疫新技術(shù) 臨床免疫學(xué)檢測具有同步化、智能化、自動化的特點(diǎn)，與傳統(tǒng)手工操作有較大的區(qū)別，如微粒子酶免疫技術(shù)、電化學(xué)發(fā)學(xué)分析技術(shù)等，毛細(xì)管電泳技術(shù)也在臨床廣泛應(yīng)用，目的，生物芯片技術(shù)使整個檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)檢測實(shí)現(xiàn)了大規(guī)模、平行化、高通量的要求。同時，組學(xué)技術(shù)、后基因技術(shù)、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)的研究也不斷深入，極大的滿足了臨床免疫學(xué)需要。
4 免疫學(xué)檢驗(yàn)定義
4.1 臨床免疫學(xué)中免疫學(xué)檢驗(yàn)為重要組織部分 以基礎(chǔ)免疫學(xué)理論作指導(dǎo)，臨床免疫學(xué)對免疫學(xué)方法及技術(shù)不斷創(chuàng)新，在對疾病研究，特別是自身免疫病、腫瘤、傳染病、血液病、免疫缺陷病、變態(tài)反應(yīng)性疾病的病發(fā)機(jī)制、診治、預(yù)后評估中發(fā)揮著重要作用，屬免疫學(xué)分支學(xué)科，是基礎(chǔ)免疫學(xué)內(nèi)容與臨床免疫學(xué)內(nèi)容的中間環(huán)節(jié)，為臨床醫(yī)師對疾病進(jìn)行研究的相關(guān)技術(shù)方法。
4.2 免疫學(xué)檢驗(yàn)的相關(guān)定義 依據(jù)免疫學(xué)原理，特別是抗體與抗原反應(yīng)原理，對各種敏感標(biāo)記進(jìn)行利用，如熒光素、發(fā)光物質(zhì)、放射性同位素等，特異地、超微量的對各種病理和生理免疫學(xué)指標(biāo)進(jìn)行分析，包括細(xì)胞的和體液應(yīng)用，行疾病診治和評估的一組醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目[6]。其要點(diǎn)為即對抗原抗體反應(yīng)原理加以利用，又可對免疫學(xué)參數(shù)的各種內(nèi)容進(jìn)行檢測。
5 免疫學(xué)檢驗(yàn)存在的問題
5.1 定位 目前，有一定數(shù)量的醫(yī)療單位中，尚未設(shè)立免疫學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)，無專業(yè)的檢驗(yàn)設(shè)備，無實(shí)驗(yàn)室，無固定的專業(yè)的檢驗(yàn)人員，免疫學(xué)檢驗(yàn)中的一些項(xiàng)目被分散在微生物實(shí)驗(yàn)室和生化實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)，對專業(yè)的發(fā)展造成了一定影響。
5.2 質(zhì)量管理分析 雖免疫學(xué)檢驗(yàn)中大部分項(xiàng)目在各大醫(yī)學(xué)中已參加了國家衛(wèi)生部相關(guān)室間質(zhì)量評估活動，但在對室內(nèi)質(zhì)量進(jìn)行控制的環(huán)節(jié)中，仍較為薄弱。對于大部分免疫學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目，在質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品上，國內(nèi)尚未做到有效統(tǒng)一，雖部分有供應(yīng)，但項(xiàng)目不全，價格昂貴[7]。故多數(shù)試驗(yàn)室質(zhì)量控制不達(dá)標(biāo)，導(dǎo)致檢驗(yàn)質(zhì)量不穩(wěn)定。目前，尚普遍存在試劑缺乏統(tǒng)一的現(xiàn)象，檢驗(yàn)結(jié)果中的假陰性、假陽性較難杜絕，為質(zhì)量管理及標(biāo)準(zhǔn)化檢查帶來了一定難度[8]。同時，專業(yè)的免疫學(xué)檢驗(yàn)人員較少，缺乏高素質(zhì)、高學(xué)歷的帶頭人，同時也缺乏嫻熟操作的技術(shù)人員[9]。此外，還存在研究內(nèi)容與臨床缺乏有效結(jié)合等，在疾病診治中未發(fā)揮有效作用[10]。
6 發(fā)展建議
針對免疫檢驗(yàn)的重要性，醫(yī)院領(lǐng)導(dǎo)和檢驗(yàn)科需重視免疫學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)的設(shè)置，設(shè)備引進(jìn)、項(xiàng)目定位和人員配備，加強(qiáng)培訓(xùn)，建全室內(nèi)質(zhì)量控制[11]，同時成立免疫檢驗(yàn)學(xué)小組，就相關(guān)問題進(jìn)行分析并制定解決方案，各級質(zhì)量部分需加強(qiáng)參考品、質(zhì)控品的管理，以提高檢驗(yàn)效果，使臨床免疫學(xué)作用落到實(shí)處[12]。
7 小結(jié)
綜上，臨床檢驗(yàn)為臨床免疫學(xué)的重要組成部分，各項(xiàng)技術(shù)的研發(fā)為臨床檢驗(yàn)學(xué)發(fā)展提供了機(jī)遇，有效縮短了檢測時間，節(jié)約了樣本用量，實(shí)現(xiàn)了疾病準(zhǔn)確、快速、無創(chuàng)的診斷。同時也需正視存在的困難，對復(fù)雜的數(shù)據(jù)行合理和有效的應(yīng)用，以減輕患者負(fù)擔(dān)，控制成本。同時加強(qiáng)基礎(chǔ)研究的合作與交流，讓從業(yè)者加強(qiáng)各種技術(shù)的培養(yǎng)和學(xué)習(xí)，提高自身綜合素質(zhì)，以滿足臨床免疫檢驗(yàn)的要求。
參考文獻(xiàn)
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[關(guān)鍵詞] 原發(fā)性骨髓增生異常綜合征；自身免疫異常；臨床特征；生存研究
[中圖分類號] R551.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2013）04（a）-0066-03
原發(fā)性骨髓增生異常綜合征（myelodysplastic syndromes，MDS）是一組以一系或多系的異常造血或無效造血為臨床特征的克隆性造血干細(xì)胞疾病。近年來，MDS與自身免疫性疾病之間的聯(lián)系不斷引起學(xué)者關(guān)注。國外文獻(xiàn)報道[1]，MDS伴發(fā)自身免疫性疾病的比率在10%以上，以類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎最為多見，其他包括白塞病、Graves病、克羅恩病等。同時部分患者雖無自身免疫性疾病的臨床表現(xiàn)，但免疫學(xué)檢查亦可存在異常。為觀察MDS合并自身免疫異?；颊叩呐R床特征，探討合并自身免疫異常對MDS患者轉(zhuǎn)歸及生存期的影響，筆者對合并自身免疫性疾病病史或免疫學(xué)檢查資料完善的146例MDS患者的臨床資料進(jìn)行了比較分析，現(xiàn)將研究資料報道如下：
1 資料與方法
1.1 一般資料
收集2009年1月～2012年6月河北省石家望而卻步市趙縣婦幼保健院治療的146例MDS患者的臨床資料。所有患者均經(jīng)骨髓穿刺涂片、骨髓細(xì)胞組織化學(xué)染色等檢查確診，免疫學(xué)檢查資料完善。根據(jù)是否合并自身免疫異常將其分為合并自身免疫異常組和免疫學(xué)檢查正常組。自身免疫異常組患者31例，男11例，女20例，年齡31～76歲，中位年齡47歲，其中12例明確患有自身免疫性疾病，9例為現(xiàn)免疫學(xué)檢查異常。免疫學(xué)檢查正常組115例，其中男75例，女40例，年齡17～82歲，中位年齡51歲。
1.2 研究方法
分析記錄兩組患者一般情況、合并自身免疫性疾病情況、血常規(guī)指標(biāo)、染色體核型分布以及轉(zhuǎn)白率、中位生存時間等指標(biāo)。免疫性疾病的實(shí)驗(yàn)室檢查由本院檢驗(yàn)中心免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室完成。隨訪及預(yù)后：所有病例隨訪至2012年6月30日，隨訪1～42個月，中位隨訪時間為15個月。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以中位數(shù)表示，采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料構(gòu)成比組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3 討論
近年來，自身免疫性疾病對MDS轉(zhuǎn)歸和預(yù)后的影響逐漸引起學(xué)者關(guān)注。臨床研究發(fā)現(xiàn)[2-3]，部分MDS患者合并存在自身免疫性疾病的概率顯著高于后者的自然發(fā)病率，另有部分患者雖無自身免疫性疾病的臨床表現(xiàn)，但免疫學(xué)檢查亦可存在異常，說明MDS與自身免疫性疾病之間的關(guān)系并非偶然。本次研究顯示，146例MDS患者中，15例（33.33%）合并自身免疫性疾病，另有16例（10.96%）患者出現(xiàn)免疫學(xué)檢查異常而無臨床癥狀，二者合計(jì)占比（21.23%），與文獻(xiàn)報道基本一致[4-5]，為MDS與自身免疫性疾病之間的聯(lián)系提供了進(jìn)一步的佐證。
MDS與自身免疫性疾病合并出現(xiàn)的內(nèi)在機(jī)理尚不明確。部分學(xué)者認(rèn)為[6-7]，MDS和自身免疫性疾病可能源自同一類型免疫異常，如T細(xì)胞功能失常，即可在引發(fā)造血干細(xì)胞破壞（發(fā)生MDS）的同時，引起人體其他組織或器官出現(xiàn)自身免疫性疾病。部分MDS患者在給予免疫抑制劑治療后病情可緩解，可為這一說法提供佐證。也有觀點(diǎn)認(rèn)為[8-9]，MDS本身即可導(dǎo)致一系列自身免疫方面的異常，包括NK細(xì)胞減少、B淋巴細(xì)胞活化、巨噬細(xì)胞受損引發(fā)免疫復(fù)合物清除受阻等，并進(jìn)一步出現(xiàn)自身免疫性疾病。由于本次研究未能準(zhǔn)確掌握患者M(jìn)DS與自身免疫異常出現(xiàn)的時間先后，因此尚難對上述假說提供證據(jù)。
本次研究顯示MDS患者合并自身免疫異常多見于年齡
此外，自身免疫性疾病對MDS轉(zhuǎn)歸和預(yù)后的影響也不容忽視。對于自身免疫性疾病對MDS患者預(yù)后的影響尚無明確結(jié)論，有研究認(rèn)為存在自身免疫異常的MDS患者預(yù)后比無免疫異常的MDS患者明顯更差，也有研究顯示兩者間并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[11-12]。本次研究顯示，合并自身免疫異常組患者轉(zhuǎn)白率與免疫學(xué)檢查正常組比較雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但其中位生存期卻明顯縮短。因此筆者傾向認(rèn)為合并自身免疫異常對MDS的預(yù)后尤其是生存期存在不良影響，但此種影響并非因轉(zhuǎn)化為急性白血病所導(dǎo)致。
總之，自身免疫性疾病與MDS之間的聯(lián)系值得臨床工作者進(jìn)一步研究、總結(jié)，以期明確二者間的內(nèi)在關(guān)系、發(fā)病機(jī)制和治療對策，提高對MDS的治療水平，改善患者預(yù)后。
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細(xì)胞儀主要由液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)4個部分組成，有些細(xì)胞儀還包括細(xì)胞分選系統(tǒng)。當(dāng)制備成單細(xì)胞懸液的待測細(xì)胞經(jīng)特異性熒光染色后放入樣品管中，通過充滿鞘液的細(xì)胞流動室，在穩(wěn)定的壓力下細(xì)胞懸液保持在鞘液中心恒速流動，排成單列由噴嘴噴出，形成細(xì)胞液柱進(jìn)入檢測區(qū)域，細(xì)胞被激光激發(fā)后發(fā)出散射光與熒光，檢測器根據(jù)光的強(qiáng)度將光轉(zhuǎn)變成與光量成比例的電脈沖，并使電脈沖經(jīng)過放大處理后，收集結(jié)果進(jìn)行分析、比較和顯示。此外，它還能在檢測時根據(jù)液滴偏轉(zhuǎn)原理進(jìn)行分選。
2在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用
細(xì)胞儀目前在醫(yī)院的檢驗(yàn)科室應(yīng)用相當(dāng)廣泛，涉及各個科室的診斷和分析，本文從免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞學(xué)以及血液檢查這幾個方面的應(yīng)用作簡單的介紹。
2．1免疫學(xué)方面的應(yīng)用
目前細(xì)胞儀用于免疫學(xué)基礎(chǔ)研究和臨床醫(yī)學(xué)的各個方面。它在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用，主要是流式免疫檢測技術(shù)。它克服了傳統(tǒng)免疫技術(shù)難以準(zhǔn)確定量的不足，并且可對單個細(xì)胞進(jìn)行單色或同時多色熒光染色標(biāo)記。自身免疫疾病、免疫缺陷性疾病、變態(tài)反應(yīng)性疾病、病毒感染、惡性腫瘤等均有淋巴細(xì)胞亞群的異常改變。所以檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD3、CD4、CD8)及其比值(CD4。。／CD8)是反映機(jī)體免疫狀態(tài)的重要參數(shù)之一。應(yīng)用不同的CD系列的單克隆抗體，細(xì)胞儀能區(qū)分出不同的淋巴細(xì)胞亞群，并計(jì)算出他們的數(shù)量及相互間的比例，對控制這些疾病的發(fā)生、發(fā)展及了解疾病的發(fā)病機(jī)制、指導(dǎo)臨床治療，都有極其重要的意義I]。細(xì)胞儀除了在淋巴細(xì)胞亞群分析外，還在細(xì)胞特異性標(biāo)志物的分析中發(fā)揮作用。細(xì)胞儀能檢測各種免疫細(xì)胞的特異性標(biāo)志物及細(xì)胞內(nèi)的各種細(xì)胞因子、表面受體(淋巴因子受體、干擾素受體、白細(xì)胞介素受體等)的定量分析，在冠心病、動脈粥樣硬化、惡性腫瘤、自身免疫性疾病的臨床應(yīng)用相當(dāng)廣泛。細(xì)胞內(nèi)的受體，如雌激素、糖皮質(zhì)激素受體的檢測，可指導(dǎo)乳腺癌的性激素治療和糖皮質(zhì)激素的治療。細(xì)胞儀與經(jīng)典化學(xué)同位素標(biāo)記測定受體法相比，優(yōu)勢在于它的單細(xì)胞測定可在混合細(xì)胞中選擇性測定其中一群，可在同一群細(xì)胞中觀察每個細(xì)胞上受體量的差異，并可將死細(xì)胞扣除¨2]。
2．2在腫瘤細(xì)胞篩查中的應(yīng)用
目前，病理學(xué)尚不能證實(shí)為惡性的交界瘤，經(jīng)細(xì)胞儀檢測出DNA非整倍體細(xì)胞時可考慮為惡性腫瘤，而病理學(xué)認(rèn)為兩性的腫瘤經(jīng)流式細(xì)胞儀測出非整倍體則提示有惡性轉(zhuǎn)變的可能。大量研究表明，癌前病變的癌變率與病變的增生程度一致，而增生程度與DNA含量的異常改變又呈平行關(guān)系。細(xì)胞儀通過精確定量DNA含量，能對癌前病變的性質(zhì)和發(fā)展趨勢作出判斷，有助于癌前病變的早期判斷。Barrett食管是食管癌的癌前病變之一，Montgomery等用細(xì)胞儀技術(shù)對58例Barrett食管進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)DNA非整倍體中有77為高度不典型增生對于造血系統(tǒng)惡性腫瘤的早期診斷，形態(tài)學(xué)上一般不具有典型的特征，應(yīng)用細(xì)胞儀的DNA倍體檢測可解決這一問題。國外科學(xué)家曾對7例早期T淋巴細(xì)胞性淋巴細(xì)胞瘤的活體標(biāo)本進(jìn)行DNA分析，發(fā)現(xiàn)這7例患者的DNA均為非整倍體，而5～12個月后，病理結(jié)果才能診斷為淋巴瘤。故認(rèn)為流式細(xì)胞術(shù)對淋巴瘤的早期診斷較之形態(tài)學(xué)方法更為敏感、準(zhǔn)確，它可以測得正常細(xì)胞與異常細(xì)胞間的微小差異，在形態(tài)學(xué)還不能作出診斷以前就可以提供確切的疾病信息j。
2．3在細(xì)胞研究中的應(yīng)用
細(xì)胞儀在細(xì)胞學(xué)研究中最重要的一環(huán)就是研究細(xì)胞凋亡的作用。細(xì)胞儀檢測凋亡細(xì)胞是結(jié)合了形態(tài)學(xué)檢測、生化改變及DNA含量變化、細(xì)胞膜磷脂分布的改變及DNA斷裂點(diǎn)標(biāo)記等幾方面。細(xì)胞儀應(yīng)用于凋亡形態(tài)學(xué)時，主要是根據(jù)細(xì)胞凋亡時出現(xiàn)細(xì)胞膜皺縮，胞質(zhì)濃縮，體積減少；因此檢測時前向角散射光(forwardscatter，F(xiàn)SC)下降，而側(cè)向角散射光(sidescatter，SS)增加，但這種表現(xiàn)只出現(xiàn)于凋亡最早期，所以，形態(tài)學(xué)檢測一般用于凋亡期。檢測凋亡較特異的方法可能是對DNA斷裂點(diǎn)進(jìn)行標(biāo)記后細(xì)胞儀檢測。在細(xì)胞凋亡過程中，半胱氨酰基天冬氨酸蛋白酶家族(Caspases)在凋亡早期才能檢測到，在凋亡過程中持續(xù)升高，凋亡晚期快速下降，通過細(xì)胞儀對Caspases一3的檢測，可動態(tài)觀察凋亡的全過程。此外，可利用細(xì)胞凋亡時膜內(nèi)側(cè)的膜磷脂酚絲胺酸(Ps)由膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到膜外的特征進(jìn)行檢測。將熒光標(biāo)記的親PS的檢測探針Annexin—V與PI聯(lián)合標(biāo)記染色，AV與處于細(xì)胞外環(huán)境的PS結(jié)合。由于早期凋亡細(xì)胞膜完整，PI不能通過完整的細(xì)胞膜，因此可定量檢測早期凋亡細(xì)胞(V—FITC一／PI一群)及壞死細(xì)胞(V—FITC／PI一群)_4j。
2．4在血液檢查中的應(yīng)用細(xì)胞儀
【關(guān)鍵詞】 免疫學(xué) 教學(xué)質(zhì)量
醫(yī)學(xué)免疫學(xué)作為生命科學(xué)發(fā)展的前沿學(xué)科，以其廣度上的多交叉、深度上的多層次、發(fā)展上的高速度成為溝通基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)重要的橋梁學(xué)科[1]。當(dāng)代醫(yī)學(xué)免疫學(xué)的發(fā)展日新月異，并和臨床疾病的預(yù)防、診斷、治療、發(fā)生、發(fā)展等諸多環(huán)節(jié)密切相關(guān)，加之免疫學(xué)理論內(nèi)容抽象，名詞概念新穎繁多，內(nèi)在聯(lián)系緊密，使之發(fā)展迅速，新理論、新知識不斷涌入。學(xué)生初次接觸時，覺得學(xué)習(xí)較為困難。面對這些特點(diǎn)，如何適應(yīng)當(dāng)代醫(yī)學(xué)免疫學(xué)發(fā)展的要求，針對免疫學(xué)知識體系的特點(diǎn)，有效地提高醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教學(xué)質(zhì)量，成為教學(xué)的關(guān)鍵。筆者從以下幾方面將醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教學(xué)體會總結(jié)如下。
1 培養(yǎng)創(chuàng)新意識、激發(fā)學(xué)習(xí)熱情
高校教育中實(shí)施素質(zhì)教育應(yīng)以培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新精神和實(shí)踐能力為重點(diǎn)，這就需要我們對傳統(tǒng)的教育模式進(jìn)行反思，正確處理好傳授知識與激發(fā)創(chuàng)新的關(guān)系。以傳授知識為主的方法，即以教師講授為中心，實(shí)行嚴(yán)格的訓(xùn)練和考試；以激發(fā)創(chuàng)新為主的方法，則讓學(xué)生感受、理解知識的產(chǎn)生和發(fā)展過程，培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)精神和創(chuàng)新思維習(xí)慣，并給以自由發(fā)展的機(jī)會。前蘇聯(lián)、日本等國采用第一種方法，造就了幾百萬工程師；而美國則采用第二種方法，造就了成百的諾貝爾獎獲得者。這兩種教育方法所反映的是繼承與創(chuàng)新的矛盾。我們通過不斷對教學(xué)方法進(jìn)行探討，感到“分層次”教學(xué)可獲得較滿意的效果，即對不同層次的學(xué)生，在傳授知識與激發(fā)創(chuàng)新上有所側(cè)重。對于本科生，以傳授知識為主，為授課學(xué)生做出簡明扼要的課件，再配以形象生動的圖片或動畫，使學(xué)生易于理解和記憶。對于碩士研究生，則著重介紹新進(jìn)展，如講到超抗原時，就其參與某些病理過程、與自身免疫應(yīng)答的關(guān)系、與免疫抑制的內(nèi)在聯(lián)系并可發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)等方面進(jìn)行深入的探討，使學(xué)生們拓寬視野，培養(yǎng)發(fā)散性思維，并能捕捉學(xué)科發(fā)展的前沿問題。
教師在授課時還可結(jié)合授課內(nèi)容，介紹一些與免疫學(xué)有關(guān)的諾貝爾獎獲得者的生平事跡，以激發(fā)學(xué)生的創(chuàng)新欲望和學(xué)習(xí)熱情。如講解淋巴細(xì)胞抗原受體的編碼基因及多樣性時，可簡要介紹因發(fā)現(xiàn)免疫球蛋白基因結(jié)構(gòu)而獲得諾貝爾獎的日本學(xué)者利根川進(jìn)(S Tonegawa)；在講解免疫耐受時，可將澳大利亞學(xué)者伯內(nèi)特（FM Bumet）在免疫耐受理論和實(shí)驗(yàn)中所取得的研究成就介紹給學(xué)生；在講解單克隆抗體時，可將德國免疫學(xué)家克勒（G Kohler）和美國美國生物化學(xué)家米爾斯坦（C Milstein）在單克隆抗體的研究和制備中所取得的偉大成就與學(xué)生分享[2]，以達(dá)到激發(fā)學(xué)生努力學(xué)習(xí)，做一名有益于社會的人。
2 靈活多樣的教學(xué)方法
根據(jù)不同內(nèi)容、不同授課對象我們分別采用不同的教學(xué)方法，如采用導(dǎo)入法、比喻法、比較法、設(shè)問法、案例法等多種多樣的教學(xué)方法，取得了很好的教學(xué)效果。
2.1 導(dǎo)入式教學(xué)法 “導(dǎo)入”好比一首樂曲的“引子”，設(shè)計(jì)巧妙的“導(dǎo)入語”能夠滲透主題，使學(xué)生很快進(jìn)入教學(xué)情境，調(diào)動學(xué)習(xí)的積極性。在免疫學(xué)的第一章“免疫學(xué)概論”教學(xué)中采用導(dǎo)入式教學(xué)法，設(shè)計(jì)的“導(dǎo)入語”為：人們常說機(jī)體好比國家，而免疫系統(tǒng)好比這個國家的軍隊(duì)，那么當(dāng)外敵入侵時，免疫系統(tǒng)是如何保護(hù)機(jī)體的呢？由此引出免疫的概念；古代人民認(rèn)為免疫即免除瘟疫的能力，由此引出抗感染免疫的概念。接下來可提出設(shè)問：免疫力僅僅就是抗感染能力嗎?之后又會自然引出現(xiàn)代免疫的新概念。這樣的“開場白”能即刻調(diào)動起學(xué)習(xí)積極性，又可引起學(xué)生的濃烈興趣。
2.2 比喻式教學(xué)法 應(yīng)用比喻式教學(xué)法，有利于學(xué)生對問題的理解。如：講授抗原在免疫應(yīng)答中的作用時，將抗原比喻為免疫系統(tǒng)的啟動劑，體內(nèi)一旦有抗原進(jìn)入即可導(dǎo)致一場戰(zhàn)役，這場戰(zhàn)役稱為免疫應(yīng)答。為使學(xué)生深刻理解抗原抗體的反應(yīng)具有特異性，將抗原與抗體的結(jié)合比喻為鑰匙和鎖的對應(yīng)關(guān)系，一把鑰匙開一把鎖，一種抗原只能與其相應(yīng)的抗體結(jié)合。在講述“補(bǔ)體”激活過程時，將激活過程比喻為“多米諾骨牌”效應(yīng)，只要推倒第1張，骨牌長龍依次倒下；即只要激活補(bǔ)體C1q成分，其經(jīng)典途徑的全過程隨后即被活化。在教學(xué)中采用貼切、恰當(dāng)、生動的比喻有時勝過千言萬語，使人豁然開朗，可調(diào)動學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，使學(xué)生輕松地掌握知識。
2.3 比較式教學(xué)法 是通過對知識結(jié)構(gòu)進(jìn)行對比、歸納，探求其內(nèi)在本質(zhì)和規(guī)律的一種教學(xué)方法。我們在教學(xué)中采用比較式教學(xué)法施教，對“適應(yīng)性免疫應(yīng)答”與“固有性免疫應(yīng)答”、“補(bǔ)體激活的經(jīng)典途徑”與“補(bǔ)體激活的旁路途徑”、“外源性抗原處理和提呈”與“內(nèi)源性抗原處理和提呈”、“T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答”與“B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答”、“人工自動免疫”與“人工被動免疫”進(jìn)行比較，收到了較好的教學(xué)效果。
2.4 設(shè)問式教學(xué)法 教師針對教學(xué)內(nèi)容準(zhǔn)確設(shè)問，能給學(xué)生以懸念，使學(xué)生牢固地掌握基礎(chǔ)知識與基本技能。如：在“免疫學(xué)診斷及免疫學(xué)防治”教學(xué)中設(shè)置這樣一些問題：為什么可用已知的抗原測定未知的抗體，或可用已知的抗體測定未知的抗原?為什么給機(jī)體注入抗原與注入抗體后免疫力維持的時間不同?為什么疫苗一般要注射多次?同學(xué)們對提出的問題很感興趣，積極發(fā)言回答問題，使學(xué)生變被動學(xué)習(xí)為主動學(xué)習(xí)[3]。
2.5 案例式教學(xué)法 該教學(xué)法是在學(xué)生掌握了有關(guān)基本知識和分析技術(shù)的基礎(chǔ)上，在教師的精心策劃和指導(dǎo)下，根據(jù)教學(xué)目的和教學(xué)內(nèi)容的要求，運(yùn)用典型案例，將學(xué)生帶入特定事件的現(xiàn)場進(jìn)行案例分析，通過學(xué)生的獨(dú)立思考或集體協(xié)作，進(jìn)一步提高其識別、分析和解決某一具體問題的能力。如在講授“超敏反應(yīng)”一章后，我們與學(xué)生們共同分析如下案例：一個八歲男孩，最近體重減輕并伴低熱，右側(cè)淋巴結(jié)腫大。無咳嗽且X線胸部檢查正常。淋巴結(jié)檢查肉芽腫性浸潤，但未見抗酸桿菌?，F(xiàn)正在等待結(jié)核分枝桿菌的微生物學(xué)培養(yǎng)結(jié)果。結(jié)核菌素皮試48小時出現(xiàn)直徑為20mm的腫脹和紅斑。試分析：（1）哪種類型的淋巴細(xì)胞與皮膚試驗(yàn)反應(yīng)有關(guān)？如何診斷？（2）給家庭成員作皮試時，男孩的五歲弟弟也呈陽性反應(yīng)，但是他很好，胸部X線檢查也正常。他的免疫應(yīng)答皮試結(jié)果說明了什么？有何意義？案例教學(xué)中，我們首先有意識地引導(dǎo)學(xué)生認(rèn)真閱讀案例，分析討論，最后，教師對學(xué)生的討論情況進(jìn)行歸納總結(jié)。案例式教學(xué)法有利于提高學(xué)生分析問題、解決問題的能力，以及理論聯(lián)系實(shí)際的能力。
3 前后聯(lián)系、融會貫通
運(yùn)用前后聯(lián)系的方法系統(tǒng)學(xué)習(xí)，達(dá)到對知識的融會貫通。例如講解體液免疫應(yīng)答時，讓學(xué)生先復(fù)習(xí)一下抗體的基本結(jié)構(gòu)、產(chǎn)生細(xì)胞、抗體的生物學(xué)功能等，并將學(xué)過的抗原提呈過程，T、B細(xì)胞的表面標(biāo)志與后面要講的體液免疫應(yīng)答過程聯(lián)系起來。在教學(xué)過程中盡力做到由淺入深，由易到難。由于體液免疫應(yīng)答過程復(fù)雜，涉及到抗原呈遞，TH細(xì)胞和B細(xì)胞的雙信號活化，漿細(xì)胞合成并分泌抗體的過程，每一過程都有許多細(xì)胞和細(xì)胞因子參與。在講解這一過程時，先在黑板上畫一簡單的反應(yīng)流程圖，再由淺入深進(jìn)行講解，逐步將該過程圖添加詳細(xì)完整。這一過程的關(guān)鍵是TH細(xì)胞的活化，其活化的三個階段中雙信號刺激又是關(guān)鍵中的關(guān)鍵，這一關(guān)鍵既是重點(diǎn)，又是難點(diǎn)，按圖講解，層層深入，已達(dá)到很好地理解免疫應(yīng)答這一復(fù)雜過程。
4 課尾進(jìn)行小結(jié)、課后及時評估
每次課的內(nèi)容講授完后，用5～10分鐘將重點(diǎn)、難點(diǎn)再一次復(fù)述，或解答學(xué)生不太清楚的問題，有益于加深學(xué)生對授課內(nèi)容的系統(tǒng)理解和掌握，對所講授的內(nèi)容形成一個清晰的脈絡(luò)[4]。課后評估就是每次上完課后，自我回顧上課中的教學(xué)情況，內(nèi)容是否講清楚，教法是否得當(dāng)，時間安排是否合適，與授課計(jì)劃有多少出入，學(xué)生的反映如何等等。這種回顧，對上好下次課、不斷提升教學(xué)水平很有幫助?？傊?。課堂教學(xué)是教師向?qū)W生傳授知識的主要方式，也是學(xué)生獲取知識的主要途徑。學(xué)生獲取和掌握知識的程度，取決于教師的綜合素質(zhì)和付出程度，為此，督促我們在教學(xué)過程中努力發(fā)揮教師的主導(dǎo)作用，上好每一堂課。
參考文獻(xiàn)
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[2] 高小明.免疫學(xué)教程[M].北京：高等教育出版社，2006:5.
關(guān)鍵詞 免疫球蛋白 補(bǔ)體 肝癌
惡性腫瘤患者往往伴有體液免疫功能的異常，為了解肝癌患者體液免疫功能的變化，測定31例肝癌患者血清免疫球蛋白lgG、lgA、lgM及補(bǔ)體C3、C4的水平。旨在探討肝癌患者血清免疫球蛋白以及補(bǔ)體檢測的臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。
資料與方法
2002年1月～2003年8月收治肝癌患者患者31例，作為肝癌組，其中男23例，女8例，年齡36～76歲，平均59.5歲。對照組28例均系來我院體檢無肝病史的健康人群，其中男19例，女9例，年齡33～71歲，平均52.5歲。
測定方法：采用免疫比濁法進(jìn)行測定，全自動生化分析儀為測定儀器，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用兩樣本均值比較的t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
結(jié) 果
肝癌患者血清中l(wèi)gG、lgA、水平明顯高于對照組（P
討 論
免疫系統(tǒng)受抗原刺激后，β淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞分泌免疫球蛋白（lg）并釋放入血液，使機(jī)體產(chǎn)生相對的抗原的體液免疫?？贵w是指能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合，并有免疫功能的免疫球蛋白[1]。本研究結(jié)果表明，肝癌患者血清中的免疫球蛋白lgG、lgA明顯高于對照組（P0.05），說明肝癌患者的體液免疫功能是增強(qiáng)的，主要表現(xiàn)在分泌lgG、lgA增多。腫瘤細(xì)胞雖是體內(nèi)的正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變而來，由于發(fā)生了深刻的遺傳改變，具有許多不同于正常細(xì)胞的生物學(xué)特性，其中有些可以被機(jī)體的免疫系統(tǒng)識別為“非己”成分并對它產(chǎn)生免疫反應(yīng)，腫瘤患者的血清中已測出對腫瘤應(yīng)答的抗體，支持腫瘤患者對腫瘤相關(guān)抗原有產(chǎn)生抗體的效應(yīng)肝癌患者免疫球蛋白lgG、lgA分泌增多的機(jī)理還不清楚[2]，是否是針對肝癌的某些腫瘤抗體（特異性或非特異性）而產(chǎn)生的抗體，或者是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抑制因子同樣抑制了TS細(xì)胞，使控制β細(xì)胞分化的能力減弱，致使β細(xì)胞功能亢進(jìn)，導(dǎo)致lgG升高還有待進(jìn)一步的研究。
大多人認(rèn)為肝臟是合成各種補(bǔ)體成分的重要場所。因此肝功能與補(bǔ)體活性關(guān)系密切。在一些肝功能下降的疾病，如慢性肝炎、肝硬化患者中，各補(bǔ)體成分可降低[3]。但本研究結(jié)果表明，肝癌患者血清中的C3高于對照組（P0.05）。對于肝癌患者補(bǔ)體升高和機(jī)制目前尚不明確。但目前主要有以下幾種說法[4]：①肝癌細(xì)胞能合成補(bǔ)體。②癌組織的某種刺激作用使補(bǔ)體生產(chǎn)增加。③肝癌患者的補(bǔ)體系統(tǒng)代償增加，以加強(qiáng)機(jī)體的體液免疫作用。
綜上所述，本研究表明，肝癌患者的體液免疫功能是增強(qiáng)的。
參考文獻(xiàn)
1 李長英.血清免疫球蛋白測定的臨床意義.工企醫(yī)刊，2002，15（1）：92.
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化學(xué)發(fā)光免疫分析包括三大類型: 即標(biāo)記化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的化學(xué)發(fā)光免疫分析、 標(biāo)記熒光物質(zhì)的熒光化學(xué)發(fā)光免疫分析和標(biāo)記酶的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析。化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)可測定內(nèi)分泌激素、 腫瘤標(biāo)志物、 血藥濃度、 傳染病和心血管疾病標(biāo)志物、 貧血及過敏原等項(xiàng)目［1］。目前對運(yùn)動員血清睪酮的檢測， 大多采用放射免疫法， 由于其自動化程度低， 不適用于快速檢測， 又有放射污染。美國Beckman．Coulter公司和法國Pasture研究院合作生產(chǎn)的Access全自動微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀， 其方法學(xué)具有高靈敏性、 高精確性、 高穩(wěn)定性等特點(diǎn)， 無需對樣本進(jìn)行測前處理， 簡便的自動化操作， 全程僅需15～20 min， 且無放射污染。本室引進(jìn)Access免疫分析系統(tǒng)對運(yùn)動員血清T進(jìn)行定量測定， 現(xiàn)對該方法的臨床應(yīng)用評價如下。
1 材料和方法
1.1 檢測對象 無錫市體育管理中心運(yùn)動員122人， 年齡≥15歲， 其中男64人， 女58人。對照組為來我院正常體檢的中學(xué)生， 男、 女各30人。采運(yùn)動員清晨靜脈血2 mL， 分離血清后進(jìn)行檢測。
1.2 材料 血清睪酮的檢測采用Access磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)。Access免疫分析系統(tǒng)及配套的T試劑盒， 沖洗緩沖液， 堿性液， 酸性液， 定標(biāo)液， 基質(zhì)液(Substrste)， 反應(yīng)杯(RV管)由BeckmanCoulter公司提供。
1.3 方法
1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別取0、 1.7、 5.2、 13.9、 27.8、 55.5 nmol/L T標(biāo)準(zhǔn)液， 在Access免疫分析系統(tǒng)中執(zhí)行自動定標(biāo)程序。以2次測定結(jié)果的均值， 進(jìn)行數(shù)學(xué)邏輯處理， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1.3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 兩組間數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
2.1 精密度測試 取低、 中、 高值的混合血清分別重復(fù)測定20次， 計(jì)算變異系數(shù)CV， 反映批內(nèi)精密度。每天對不同濃度的質(zhì)控血清測定1次， 連續(xù)20 d， 評價批間精密度。低、 中、 高值批內(nèi)CV分別為4.1、 2.7、 1.6; 批間CV 分別為4.4、 3.2、 2.6。
2.2 血清睪酮檢測結(jié)果及統(tǒng)計(jì)分析 運(yùn)動員血清睪酮檢測結(jié)果顯示， 男女運(yùn)動員與各自相同性別正常人對照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 表1 運(yùn)動員血清睪酮檢測
3 討論
Access免疫分析通過在RV管中加入包被單克隆抗體的磁性微粒、 血清樣品、 堿性磷酸酶(ALP)標(biāo)記的抗原， 經(jīng)37℃孵育后， 形成競爭法抗原抗體結(jié)合成的復(fù)合物。再加入底物 AMPDD(一種金剛基二螺［4， 4］二氧乙烷的磷酸脂)發(fā)光劑。AMPDD經(jīng)ALP水解， 生成一種不穩(wěn)定的陰離子， 該陰離子分解時持續(xù)發(fā)光， 且與ALP量成正比， 通過測定相對發(fā)光單位(relative light unit， RLU)定量檢測血清中物質(zhì)的濃度［2］。
對運(yùn)動員血清T檢測結(jié)果表明， CV％值較小， 說明儀器重復(fù)性較好， 測定結(jié)果穩(wěn)定。 T的測定濃度范圍在0～55.5 nmol/L之間， 能夠滿足運(yùn)動員正常測試的需要。自動化的Access免疫分析系統(tǒng)， 既具有化學(xué)發(fā)光檢測的高靈敏度， 又具有免疫分析的高特異性， 準(zhǔn)確性、 穩(wěn)定性， 能夠快速及時的為運(yùn)動員訓(xùn)練監(jiān)控提供可靠的依據(jù)。另外， 它是用化學(xué)試劑來標(biāo)記抗原或抗體， 避免了因使用放射性核素而帶來的對人體和環(huán)境的危害。
但由于試劑成本的原因， Access免疫分析系統(tǒng)仍未廣泛應(yīng)用于臨床。隨著臨床需求的進(jìn)一步擴(kuò)展， 高靈敏度、 寬線性Access免疫分析系統(tǒng)的將得到廣泛應(yīng)用。
參考文獻(xiàn)
【關(guān)鍵詞】 慢性粒細(xì)胞性白血?。环治?；核象；染色體；流式細(xì)胞儀
慢性粒細(xì)胞性白血病是慢性白血病常見類型中的一種，亦是血液系統(tǒng)惡性克隆疾病中較為多見的一種。今年來國內(nèi)發(fā)病有增加趨勢，尤以中老年人居多。若得不到早期診斷和及時的治療，預(yù)后不好，影響生活治療甚至危及生命[1]?，F(xiàn)如今，對該疾病的診斷新進(jìn)展有免疫學(xué)、遺傳學(xué)及分子生物學(xué)。不過基礎(chǔ)的還屬核象的實(shí)驗(yàn)室輔檢。依據(jù)國際慢粒形態(tài)學(xué)分期標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)筆者選本院來診確診為慢性粒細(xì)胞性白血病的病人共計(jì)30例，對所有病人基本情況、骨髓像情況、染色體以及細(xì)胞形態(tài)觀察并記錄總結(jié)、分析，現(xiàn)將結(jié)果報告如下：
1 資料與方法
1.1 一般資料 取2010年3月至2012年8月于本院入院并診斷慢性粒細(xì)胞白血病的病人30例，男性為21例，女性為9例，年齡43至79歲，平均（61.4±19.3）歲。慢粒的形態(tài)學(xué)分期標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)國際慢粒形態(tài)學(xué)分期標(biāo)準(zhǔn)。之后對30例病人長期隨訪。
1.2 檢測方法 由本院?？漆t(yī)師行骨髓活檢，采集新鮮標(biāo)本，每個標(biāo)本采取200個細(xì)胞。儀器予本院Amnis公司的圖像流式細(xì)胞儀ImageStream100，利用流式細(xì)胞儀對所有病例進(jìn)行免疫分型。做NAP細(xì)胞化學(xué)染色，準(zhǔn)備染色體培養(yǎng)。觀察骨髓象及染色體變化。
1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)[2] 慢粒的形態(tài)學(xué)分期標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)國際慢粒形態(tài)學(xué)分期標(biāo)準(zhǔn)。
2 結(jié)果
2.1 骨髓象
2.1.1 細(xì)胞化學(xué)染色 骨髓涂片檢查結(jié)果可見細(xì)胞形態(tài)特征：細(xì)胞化學(xué)染色可見細(xì)胞形態(tài)為：中性粒細(xì)胞大小各不相同，圓形或核類圓形，能夠見到凹陷、卷曲、染色質(zhì)粗，部分能夠見到2、3個細(xì)胞核，漿液紫色且較多，能夠見到嗜酸粒和嗜堿粒細(xì)胞，然而RBC能夠見到核固縮，發(fā)現(xiàn)3例戈謝氏細(xì)胞。
2.1.2 骨髓增生度、粒紅比和巨核細(xì)胞變化 選取的所有慢性粒細(xì)胞白血病病人中，骨髓增生度、粒紅比及巨核細(xì)胞的變化5-5000多個不等。核象極活躍的病人共有24例、活躍6例。粒細(xì)胞與紅細(xì)胞比值無特異性病人3例（10%）、比值升高病人21例（70%）。巨核細(xì)胞增高18例（60%）、降低9例（30%）。各慢性粒細(xì)胞性白血病病人核象增生度、粒細(xì)胞紅細(xì)胞比值變化與巨核細(xì)胞變化結(jié)果見表1：
3 討論
現(xiàn)如今，伴隨慢性粒細(xì)胞白血病發(fā)病率的增加，以及不良的預(yù)后對病人的生活產(chǎn)生的影響加重，?？漆t(yī)生對慢粒的研究更為深入[3]。對該疾病的診斷新進(jìn)展有免疫學(xué)、遺傳學(xué)，不過基礎(chǔ)的還屬核象的實(shí)驗(yàn)室輔檢。明確慢性粒細(xì)胞白血病的核象的對更為明確的診斷該疾病有重要作用。能夠更熟練的掌握該病的核象特征也為今后的臨床診療工作提供了充分依據(jù)。
筆者通過選取本院30例慢性粒細(xì)胞白血病的病人并對其核象及染色體進(jìn)行觀察分析，可以看出：慢粒的骨髓增生明顯，巨核細(xì)胞數(shù)量有明顯的升高，能夠見到嗜酸粒及嗜堿粒增加。在細(xì)胞化學(xué)染色可見，該病WBC與健康人的WBC的形態(tài)大不相同，有細(xì)胞核萎陷、核漿量少等等。觀察染色體可見慢性粒細(xì)胞白血病中較多病例Ph+，僅有少數(shù)Ph染色體陰性（Ph-）。有核增生極度活躍，以粒系增生為主，造血組織占整個骨髓體積的75%-90%，脂肪含量明顯減少。有研究報道，部分病人可以發(fā)生骨髓纖維化。
中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶的測定，國內(nèi)報道慢性粒細(xì)胞白血病有90%以上有積分的降低或者確實(shí)，經(jīng)治療后白細(xì)胞下降可接近正常、炎癥感染時后該酶活性可以升高或者接近正常。其檢測有助于與類白血病反應(yīng)及其他骨髓增殖性腫瘤相區(qū)別，也可以用作為預(yù)后的指標(biāo)。
伴隨我國人口進(jìn)入老年化階段，老年人相關(guān)疾病的不斷增加，加強(qiáng)對慢性粒細(xì)胞白血病的分析與討論是行之有效的解決辦法?？偠灾?，慢性粒細(xì)胞白血病病人以核象作為實(shí)驗(yàn)室輔檢能夠作為確診的根據(jù)。染色體培養(yǎng)及觀察可以輔助診斷。明確核象的特征可以為臨床上的治療提供可靠的根據(jù)。
參考文獻(xiàn)
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