序言：寫作是分享個(gè)人見解和探索未知領(lǐng)域的橋梁，我們?yōu)槟x了8篇的跳級(jí)申請(qǐng)書樣本，期待這些樣本能夠?yàn)槟峁┴S富的參考和啟發(fā)，請(qǐng)盡情閱讀。

第1篇

Abstract： Aiming at the serious erosion of the riverbed， rock slope， bare and non covered， no underwater blasting and other special circumstances， creatively put forward the new technology of special-shaped steel cofferdam， study the concrete sealing techniques of the special-shaped double wall steel cofferdam and the construction technologies， and propose the solution to solve some problems in the construction. In order to provide references for the construction of similar projects， the pouring construction of pile caps in water is successfully completed without the underwater blasting.

關(guān)鍵詞： 無覆蓋層河床；深水基礎(chǔ)；異形雙壁鋼圍堰；封底；施工技術(shù)

Key words： intectate riverbed；deep foundation；deformed double wall steel cofferdam；sealing；construction technology

中圖分類號(hào)：TU753.62 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-4311（2017）03-0122-03

0 引言

雙壁鋼圍堰不僅是承臺(tái)施工擋水結(jié)構(gòu)，常常也作為鉆孔平臺(tái)的支撐結(jié)構(gòu)，因其整體穩(wěn)定性好，結(jié)構(gòu)承受水頭壓力、水流沖擊力及施工機(jī)具、支架所產(chǎn)生豎向力的能力較強(qiáng)，具有其它圍堰結(jié)構(gòu)無法比擬優(yōu)點(diǎn)，目前廣泛應(yīng)用于大型橋梁深水基礎(chǔ)的施工中。

在通常的地質(zhì)及施工條件下，雙壁鋼圍堰制作、下沉著床及封底等技術(shù)已是非常成熟。但對(duì)于河床無覆蓋層，基巖堅(jiān)硬，且因周邊條件限制無法進(jìn)行水下爆破清基的情況下，無法按常規(guī)施工方法進(jìn)行雙壁鋼圍堰的制作、下沉著床及封底等施工。本項(xiàng)目通過*****大橋工程深水承臺(tái)的施工實(shí)踐，探索與研究了在水深11m，基巖且不能進(jìn)行水下爆破的施工條件下，采用異形雙壁鋼圍堰進(jìn)行承臺(tái)施工的新技術(shù)。文中詳細(xì)描述了異形雙壁鋼圍堰的施工技術(shù)和方法，以及在施工中所遇到的技術(shù)難題的解決及處理技術(shù)措施，希望給在類似橋梁工程的建設(shè)者提供一些思路與啟示。

1 工程概況

******鐵路大橋橋型布置為3×32m預(yù)應(yīng)力混凝土簡支T梁+（55+100+55m）預(yù)應(yīng)力混凝土連續(xù)剛構(gòu)（主橋）+2×32m預(yù)應(yīng)力混凝土連續(xù)梁橋。其5號(hào)主墩位于深水中，采用鉆孔樁基礎(chǔ)，墩身為雙薄壁柔性墩，下段為矩形實(shí)心截面，上段為矩形空心截面。

5號(hào)墩采用矩形低樁承臺(tái)的形式，承臺(tái)尺寸為12.2m×10.3m×4m，承臺(tái)嵌入基巖內(nèi)，基礎(chǔ)為8根樁徑2.0m的鉆孔灌注樁，樁長為12m。

橋位區(qū)屬于河流侵蝕河谷地貌，河谷呈V字形，兩岸階地多被第四系地層覆蓋。為弱-中風(fēng)花崗巖，中厚-巨厚層狀構(gòu)造，巖石堅(jiān)硬，裂隙稍發(fā)育，多閉合。5號(hào)主墩為深水墩，墩位處河床無覆蓋層，基巖，河床面傾斜，起伏較大，承臺(tái)范圍內(nèi)河床沿橋縱向高差3.8m，沿橋橫向高差5.5m。

2 深水斜巖雙壁鋼圍堰施工技術(shù)創(chuàng)新

5號(hào)墩位于河流深水中，施工期間常水位深約為11m。河床無覆蓋，基巖，巖性堅(jiān)硬。橋墩承臺(tái)嵌入基巖達(dá)4m左右，如果承臺(tái)施工采用常規(guī)形式的雙壁鋼圍堰，則需對(duì)基坑進(jìn)行大面積水下爆破及基底清碴。但基巖為花崗石硬巖，且構(gòu)造復(fù)雜，承臺(tái)基坑的爆破及清渣施工難度高，工程量大，工期長。

此外，距本橋15m的上游處為既有鐵路橋梁。鐵路運(yùn)營繁忙，進(jìn)行水下爆破施工時(shí)對(duì)既有橋梁基礎(chǔ)及鐵路的安全運(yùn)營造成影響，在不能采取確保既有橋梁基礎(chǔ)及鐵路安全運(yùn)營有效措施的情況下，鐵路部門不允許進(jìn)行水下爆破施工。

因此本項(xiàng)目在不能進(jìn)行水下爆破的前提下，開展了橋梁深水基礎(chǔ)雙壁鋼圍堰施工的技術(shù)及工藝創(chuàng)新，以減少基底整平清碴量。在鋼圍堰的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)方面突破了常規(guī)堰壁等高的結(jié)構(gòu)形式，采用堰壁不等高，順應(yīng)地形變化的異形雙壁鋼圍堰的新結(jié)構(gòu)。突破了常規(guī)的雙壁鋼圍堰結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)理念，進(jìn)行了技術(shù)創(chuàng)新。

3 深水斜巖基礎(chǔ)異形雙壁鋼圍堰設(shè)計(jì)及施工

3.1 異形雙壁鋼圍堰設(shè)計(jì)

3.1.1 總體設(shè)計(jì)方案

第2篇

[關(guān)鍵詞] 尿毒清顆粒； 腎衰竭； 腎間質(zhì)纖維化； SnoN； 轉(zhuǎn)化生長因子β1/Smads信號(hào)通路

Effects and mechanisms of UCG ameliorating renal interstitial fibrosis by

regulating TGFβ1/SnoN/Smads signaling pathway in renal failure rats

WU Wei1，2， HUANG Yanru 3， WAN Yigang2，4 *， YANG Haiming2， MAO Zhimin1， YANG Jingjing1， SHI Ge1， SUN Wei4 *

（1 Department of Traditional Chinese Medicine， Nanjing Drum Tower Hospital Clinical College of

Traditional Chinese and Western Medicine， Nanjing University of Chinese Medicine， Nanjing 210008， China；

2 Department of Traditional Chinese Medicine， Nanjing Drum Tower Hospital， the Affiliated

Hospital of Nanjing University Medical School， Nanjing 210008， China；3 Division of Molecular

Signaling， Department of Advanced Biomedical Research， Interdisciplinary Graduate School of

Medicine and Engineering， University of Yamanashi， Yamanashi 4093898， Japan；

4 Research Institute of Kidney Disease， Nanjing University of Chinese Medicine， Nanjing 210029， China）

[Abstract] This study was aimed to demonstrate preliminarily the effects and mechanisms of uremic clearance granule （UCG） ameliorating renal interstitial fibrosis （RIF） by regulating transforming growth factor （TGF）β1/SnoN/Smads signaling pathway in vivo Fifteen rats were randomly divided into 3 groups：the normal group，the model group and the UCG group The rats with renal failure were induced by intragastric administration of adenine and unilateral ureteral obstruction （UUO） After modeling，the rats in the UCG group and in the other groups were intervened by intragastric administration of UCG and distilled water respectively during 3 weeks The body weight and 24 h urinary protein excretion （Upro） in all rats were tested after drug administration All rats were killed after drug administration for 3 weeks，blood and kidneys were collected and weighted，kidney appearance and renal morphological characteristics were observed In addition，serum biochemical indices and the protein expressions of TGFβ1，SnoN，phosphorylated Smad2/3 （pSmad2/3） and Smad7 in the kidney were evaluated respectively The results indicated that，after the intervention of UCG，the general state of health，kidney appearance，serum creatinine （Scr），blood urea nitrogen （BUN），uric acid （UA），albumin （Alb），Upro and renal morphological change in model rats were improved in different degrees，respectively Moreover，UCG downregulated the protein expressions of TGFβ1 and pSmad2/3，and upregulated the protein expressions of SnoN and Smad7 in the kidney In conclusion，UCG reduces extracellular matrix （ECM） synthesis and delays the progression of renal failure via possibly multitargeting at regulating TGFβ1/SnoN/Smads signaling pathway in vivo

[Key words] uremic clearance granule； renal failure； renal interstitial fibrosis； SnoN； transforming growth factorβ1/Smads signaling pathway

doi：10.4268/cjcmm20161220

腎衰竭是各種慢性腎臟病（chronic kidney disease，CKD）發(fā)展至終末期腎病的最終轉(zhuǎn)歸[1]。無論何種病因，在腎衰竭進(jìn)展過程中，腎組織損傷都有其共同的病理基礎(chǔ)，也就是腎纖維化，其中，腎間質(zhì)纖維化程度與腎衰竭進(jìn)展速度密切相關(guān)[2]。腎間質(zhì)纖維化（renal interstitial fibrosis，RIF）主要表現(xiàn)為腎小管萎縮和管周毛細(xì)血管網(wǎng)匱乏、腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤、肌成纖維細(xì)胞活化和增生以及細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）過度合成和異常沉積[34]。研究表明[56]，RIF典型的組織形態(tài)特征就是ECM合成和降解的失衡，而這一失衡的過程與致纖維化因子――轉(zhuǎn)化生長因子（transforming growth factor，TGF）β1及其Smads信號(hào)通路密切相關(guān)。因此，抑制TGFβ1表達(dá)，調(diào)控TGFβ1/Smads信號(hào)通路活性，減少ECM合成等手段已成為國內(nèi)外延緩腎衰竭進(jìn)展的常規(guī)措施。

尿毒清顆粒（uremic clearance granule，UCG）是臨床上治療慢性腎衰竭（chronic renal failure，CRF）的常用中藥復(fù)方制劑，具有健脾利濕、通腑降濁、活血化瘀等功效[7]。國內(nèi)的臨床研究表明，UCG可以改善CRF患者腎功能，延緩其進(jìn)入腎替代治療的時(shí)間[7]。筆者所屬團(tuán)隊(duì)的前期研究顯示，UCG改善腎功能的作用與其調(diào)節(jié)腎組織TGFβ1/Smads信號(hào)通路中關(guān)鍵信號(hào)分子表達(dá)而干預(yù)ECM失衡有關(guān)[8]。在RIF形成過程中，盡管致纖維化因子TGFβ1發(fā)揮著關(guān)鍵作用，但是，TGFβ1本身也是一個(gè)重要的抗炎因子，對(duì)于人類而言，TGFβ1的長期抑制可能會(huì)引發(fā)炎癥等不利后果；對(duì)于鼠類動(dòng)物模型，TGFβ1的缺乏直接會(huì)導(dǎo)致炎癥相關(guān)性死亡[9]。因此，單純地抑制TGFβ1表達(dá)并不是治療RIF的理想方法。最近的研究表明，TGFβ1及其下游的Smads信號(hào)通路存在受體前后多個(gè)環(huán)節(jié)的負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制，其中，Ski相關(guān)蛋白（Skirelated novel protein，SnoN）作為轉(zhuǎn)錄共抑制因子可以結(jié)合到激活的Smads復(fù)合物上而形成轉(zhuǎn)錄失活復(fù)合物，抑制TGFβ1靶基因的轉(zhuǎn)錄，負(fù)向調(diào)控TGFβ1表達(dá)，最終，影響臟器纖維化的形成和發(fā)展[1012]。據(jù)報(bào)道[13]，在糖尿病大鼠腎小管上皮細(xì)胞中的SnoN表達(dá)減少，Smad2/3磷酸化水平和TGFβ1表達(dá)水平增高，RIF明顯加劇；而對(duì)于同樣由鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病腎病模型鼠，黃連素可以調(diào)控TGFβ1/SnoN/Smad信號(hào)通路的動(dòng)態(tài)平衡，使腎組織中SnoN和Smad7蛋白表達(dá)增加，TGFβ1和Smad2/3蛋白表達(dá)減少[14]。據(jù)此，筆者推測，UCG改善RIF的作用還可能與Smads負(fù)性調(diào)節(jié)因子SnoN有關(guān)?；诖笫竽I衰竭模型，筆者試圖從新的角度初步闡明UCG在體內(nèi)調(diào)控TGFβ1/SnoN/Smads信號(hào)通路而改善RIF的作用和機(jī)制。

1 材料

11 動(dòng)物

15只8周齡左右的雄性Sprague Dawley（SD）大鼠（SPF）購自總院動(dòng)物中心（批號(hào)SLXK201112），飼養(yǎng)于南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院（簡稱鼓樓醫(yī)院）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，所有大鼠均喂予標(biāo)準(zhǔn)飼料，并自由飲水，大鼠購回后適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

12 藥物制備

腺嘌呤（adenine）購自Sigma公司，將腺嘌呤（1 g）溶解于50 mL牛奶中，配制成20 g?L-1的腺嘌呤懸濁液。UCG購自廣州康臣藥業(yè)有限公司（批準(zhǔn)文號(hào)Z10970122），將UCG（15 g）溶解于50 mL蒸餾水中，配制成30 g?L-1的UCG懸濁液。

13 試劑

全蛋白提取試劑盒，二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白濃度測定試劑盒，蛋白相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)記物均購自凱基公司；蛋白上樣緩沖液購自碧云天公司；脫脂奶粉購自伊利公司；聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜，辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）顯色液均購自Millipore公司；兔抗大鼠SnoN多克隆抗體，兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗體均購自Abcam公司；兔抗大鼠Smad7單克隆抗體，兔抗大鼠磷酸化Smad2/3（phosphorylated Smad2/3，pSmad2/3）單克隆抗體均購自Santa Cruz公司；小鼠抗大鼠甘油醛磷酸脫氫酶（glyceraldehyde3phosphate dihydrogenase，GAPDH）單克隆抗體以及辣根過氧化物酶（horse radish peroxidase，HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體均購自Bioworld公司。

2 方法

21 模型制作方法

采用腺嘌呤灌胃聯(lián)合單側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)（unilateral ureteral obstruction，UUO）的方法建立大鼠腎衰竭模型。在實(shí)驗(yàn)開始的第1～14天進(jìn)行腺嘌呤（150 mg?kg-1）灌胃；第15天，行左側(cè)輸尿管結(jié)扎手術(shù)。腹腔注射氯胺酮和地西泮等體積混合液（3 mg?kg-1），麻醉后，將大鼠固定于手術(shù)板上，取仰臥位，常規(guī)消毒，左腹部切口1～15 cm，逐層切開皮膚、肌肉，暴露左腎，鈍性分離腎周脂肪，沿腎門部位尋找輸尿管，在輸尿管上、下段結(jié)扎，并于中間處剪斷；分層縫合切口，予青霉素鈉（20萬U/只）腹腔注射，連續(xù)3 d。正常組大鼠不予任何干預(yù)。

22 分組和給藥方法

將15只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表分為3組：正常組、模型組、尿毒清組，每組各5只。UCG的臨床治療量[7]為30 g?d-1，按動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)換算公式，大鼠的有效量相當(dāng)于每天5 g?kg-1。尿毒清組大鼠于術(shù)后第2天開始予UCG灌胃，正常組和模型組大鼠同時(shí)給予蒸餾水2 mL灌胃，每日1次，連續(xù)3周。各組大鼠自給藥開始計(jì)時(shí)，第3周末，經(jīng)腹腔注射氯胺酮麻醉，心臟穿刺處死，采集血液樣本和腎組織而進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的檢測。

23 觀察指標(biāo)及檢測方法

231 一般情況 每天觀察各組大鼠精神、飲食、飲水、皮毛色澤以及活動(dòng)情況等；藥物和蒸餾水干預(yù)前后，每周稱量大鼠體重。

232 尿液、血清生化指標(biāo) 藥物干預(yù)后第3周末，分e將各組大鼠放入金屬代謝籠，禁食，自由飲水，收集24 h尿液，倍比稀釋后，采用考馬斯亮藍(lán)法測定24 h尿蛋白排泄量（urinary protein excretion，Upro）。次日，在氯胺酮麻醉狀態(tài)下解剖大鼠胸腔，經(jīng)心臟采血。采用全自動(dòng)生化分析儀檢測大鼠血清生化指標(biāo)，包括血清肌酐（serum creatinine，Scr），血清尿素氮（blood urea nitrogen，BUN），尿酸（uric acid，UA），白蛋白（albumin，Alb），總膽固醇（total cholesterol，TC），甘油三酯（triglyceride，TG）等。

233 腎臟組織形態(tài)特征 解剖大鼠腹腔，自腎門處摘取兩側(cè)腎臟，腎臟摘除后，分離皮髓質(zhì)，并取少量腎皮質(zhì)（腎臟的上極或下極）固定于10%中性甲醛內(nèi)，經(jīng)脫水16 h后，石蠟包埋，切片3 μm，進(jìn)行過碘酸雪夫（periodic acid schiff，PAS）染色；借助光學(xué)顯微鏡（光鏡），觀察腎間質(zhì)ECM沉積程度；每張切片隨機(jī)選取20個(gè)腎小球，采用病理圖像分析系統(tǒng)Imagepro plus（IPP）計(jì)算腎間質(zhì)ECM相對(duì)面積（ECM /腎間質(zhì)面積）。

234 腎組織TGFβ1，SnoN，pSmad2/3，Smad7蛋白表達(dá) 采用Western blot檢測腎組織TGFβ1，SnoN，pSmad2/3，Smad7蛋白表達(dá)量。從-80 ℃冰箱中取出100 mg腎組織，用剪刀剪碎；用PBS沖洗腎組織，放入4 ℃離心機(jī)，3 000 r?min-1離心5 min，反復(fù)沖洗，再離心，共3次；棄去PBS沖洗液，向腎組織中加入含蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑和苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF）的總蛋白裂解液，用電動(dòng)勻漿機(jī)勻漿，在冰上放置30 min，每隔3 min震蕩1次，最后，再次放入4 ℃離心機(jī)，12 000 r?min-1離心30 min，取上清液（即總蛋白），少量用于BCA法測定蛋白濃度，其余按4∶1與蛋白上樣緩沖液混勻，在沸水中煮10 min進(jìn)行蛋白變性，于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。提取總蛋白后，配制分離膠和濃縮膠，分別加樣，在電泳槽中加滿電泳緩沖液進(jìn)行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gelelectrophoresis，PAGESDS）。電泳完畢，取下凝膠，根據(jù)目的蛋白的位置留取相應(yīng)凝膠，并將凝膠上的蛋白電轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上，用含10%脫脂奶粉的Tris buffered saline tween（TBST）緩沖液[20 mmol?L-1 Tris HCl，150 mmol?L-1 NaCl，005%聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯（Tween 20）]封閉2 h。分別向PVDF膜中加入相應(yīng)的一抗[SnoN（1∶800），TGFβ1（1∶1 000），pSmad2/3（1∶800），Smad7（1∶800），GAPDH（1∶1萬）]，室溫孵育4 h，用TBST緩沖液洗滌約1 h。分別加入二抗（HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體），室溫孵育2 h，再次用TBST緩沖液洗滌約1 h。取出PVDF膜，將HRP顯色液均勻地涂在PVDF膜上，在暗室曝光，定影。用Quantity one 411軟件進(jìn)行光密度分析，結(jié)果分別與GAPDH光密度相對(duì)照，其比值表示蛋白相對(duì)表達(dá)量。

235 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用±s表示。組間比較在進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)后采用單因素方差分析，P

3 結(jié)果

31 UCG對(duì)模型鼠一般情況、體重的影響

模型組和尿毒清組大鼠均出現(xiàn)明顯的精神萎靡，活動(dòng)度下降，食欲不振，輕度腹瀉，毛發(fā)枯暗而雜亂等情況，其中，模型組大鼠最為明顯，經(jīng)UCG干預(yù)后，上述情況均有所改善。自術(shù)后（造模后0周）開始，模型組大鼠體重增長緩慢，經(jīng)UCG干預(yù)后，體重有所上升，與模型組大鼠比較，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

32 UCG對(duì)模型鼠尿、血清生化指標(biāo)的影響

在造模后第3周末，模型組、尿毒清組大鼠Upro，Scr，BUN，UA均有所升高，與正常組大鼠比較，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

33 UCG對(duì)模型鼠腎臟組織形態(tài)的影響

經(jīng)光鏡觀察，正常組大鼠腎小球毛細(xì)血管襻開放良好，腎小管上皮細(xì)胞排列整齊，未見腎間質(zhì)ECM增寬和明顯的炎性細(xì)胞浸潤（圖1 A）；模型組大鼠腎小管上皮細(xì)胞排列紊亂，腎小管萎縮、塌陷，大量炎癥細(xì)胞浸潤，腎間質(zhì)內(nèi)ECM面積增多（圖1 B），與正常組大鼠比較，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

34 UCG對(duì)腎組織pSmad2/3和Smad7蛋白表達(dá)的影響

在造模后第3周末，模型組大鼠腎組織pSmad2/3蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)，與正常組大鼠比較，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

35 UCG對(duì)腎組織TGFβ1和SnoN蛋白表達(dá)的影響

在造模后第3周末，模型組大鼠腎組織TGFβ1蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)，與正常組大鼠比較，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

4 討論

腺嘌呤在體內(nèi)通過黃嘌呤氧化酶的作用生成衰竭。腺嘌呤致病起于“炎癥”，其最終的腎小管/間質(zhì)病變特征與人類腎衰竭頗為相似[15]。然而，值得注意的是，腺嘌呤引起的腎功能減退是可逆的。筆者發(fā)現(xiàn)，如果腺嘌呤給藥時(shí)間小于4周，腎小管/間質(zhì)損傷和腎功能指標(biāo)是可以自行恢復(fù)至正常水平的，這一點(diǎn)，與國外同類研究的結(jié)論相似[16]。為了模擬人類CRF的病變過程，筆者采用腺嘌呤灌胃聯(lián)合UUO的方法而建立腎衰竭模型。結(jié)果顯示，在造模后的第5周末，模型鼠腎臟腫大，蒼白而缺血，腎盂高度擴(kuò)張，腎皮質(zhì)變??；腎間質(zhì)出現(xiàn)明顯的纖維化病理特征，包括腎小管上皮細(xì)胞排列紊亂，腎間質(zhì)出現(xiàn)明顯的ECM增寬，ECM及膠原所占面積呈彌漫性增加，腎小管萎縮、塌陷，大量炎癥細(xì)胞浸潤等；腎功能指標(biāo)也相應(yīng)上升，其中，Scr達(dá)（13214±945）μmol?L-1，BUN達(dá)（2383±452） mmol?L-1，UA達(dá)（15414±1779） μmol?L-1。盡管模型鼠的造模時(shí)間不夠長，但是，其典型的腎小管/間質(zhì)病變特征和穩(wěn)定的生化指標(biāo)可以模擬人類早、中期階段的CRF。因此，筆者認(rèn)為，腺嘌呤灌胃聯(lián)合UUO誘導(dǎo)的腎衰竭模型可以用于CRF藥效和藥理學(xué)研究。

臨床上，反映腎臟排泄功能的經(jīng)典指標(biāo)是Scr，BUN以及UA。筆者發(fā)現(xiàn)，UCG給藥3周后，腎衰竭模型鼠Scr，BUN和UA明顯下降，同樣，在腎臟組織形態(tài)特征方面，RIF的病理改變也得到相應(yīng)的改善。這些結(jié)果再次印證了UCG是治療CRF的有效藥物。然而，UCG在體內(nèi)是直接促進(jìn)氮質(zhì)代謝產(chǎn)物的排泄？還是作用于RIF的形成和發(fā)展而間接改善腎功能？迄今為止，其機(jī)制不是很清楚。筆者所屬團(tuán)隊(duì)的前期研究表明，對(duì)于腺嘌呤灌胃聯(lián)合UUO誘導(dǎo)的腎衰竭模型鼠，UCG在體內(nèi)的作用靶點(diǎn)是調(diào)控ECM降解的關(guān)鍵酶――基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）[8]。盡管如此，UCG作為多成分的中藥復(fù)方制劑，它對(duì)經(jīng)典的TGFβ1/Smads信號(hào)通路中的關(guān)鍵信號(hào)分子――pSmad2/3和Smad7蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)作用也是不容忽略的。筆者發(fā)現(xiàn)，經(jīng)UCG干預(yù)后，腎衰竭模型鼠腎組織TGFβ1和pSmad2/3蛋白表達(dá)下調(diào)，TGFβ1/Smad信號(hào)通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑被阻斷；另一方面，UCG促進(jìn)Smad7蛋白表達(dá)上調(diào)，而Smad7本身又是可以阻止Smad2和Smad3磷酸化的。因此，UCG調(diào)控TGFβ1/Smads信號(hào)通路而干預(yù)RIF是其間接改善腎功能的證據(jù)之一。值得注意的是，盡管UCG由10余種單味中藥（大黃、黃芪、白術(shù)、茯苓、制何首烏、川芎、丹參、、姜半夏、甘草等）組成，而且，含有異黃酮、大黃素、黃芪甲苷、芍藥苷、丹酚酸A等多種單體[7]，但是，Smads信號(hào)通路中的關(guān)鍵信號(hào)分子――pSmad2/3和Smad7都能呈雙向性而受之影響，在不能使用體內(nèi)特異性信號(hào)阻斷劑加以佐證的前提下，筆者不禁想到，既然Smads信號(hào)通路的上游是有負(fù)性調(diào)控因子SnoN存在的，那么，UCG改善腎衰竭模型鼠RIF的作用是否與其有關(guān)呢？

研究表明[17]，原癌基因cski/sno編碼的白SnoN是TGFβ1/Smads信號(hào)通路的負(fù)性調(diào)控因子，通過與Smads蛋白相互作用來抑制TGFβ1靶基因的轉(zhuǎn)錄，從而，負(fù)向調(diào)節(jié)TGFβ1/Smads信號(hào)通路的活性。據(jù)報(bào)道[18]，在UUO誘導(dǎo)的RIF模型中，TGFβ1的表達(dá)水平進(jìn)行性增加，SnoN蛋白水平進(jìn)行性減少，在造模后的第14天，SnoN減少了約90%，此時(shí)，模型鼠RIF最為嚴(yán)重。國內(nèi)學(xué)者發(fā)現(xiàn)，對(duì)于相同的UUO大鼠模型，模型鼠出現(xiàn)腎小管萎縮，管腔擴(kuò)張，腎間質(zhì)大量膠原纖維沉積，腎間質(zhì)明顯增寬等典型的RIF病理特征；腎組織中TGFβ1含量顯著增加，SnoN蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)，而川芎嗪可以降低模型鼠腎組織中TGFβ1含量，恢復(fù)Smads負(fù)性調(diào)控因子SnoN蛋白表達(dá)水平[19]。筆者的研究結(jié)果顯示，在腺嘌呤灌胃聯(lián)合UUO誘導(dǎo)的腎衰竭模型中，TGFβ1與SnoN的蛋白表達(dá)水平的確呈反向變化，pSmad2/3和Smad7的表達(dá)水平也有隨之明顯變化，這種變化與模型鼠腎組織RIF有緊密聯(lián)系；UCG在體內(nèi)反向調(diào)節(jié)了模型鼠腎組織TGFβ1和SnoN蛋白表達(dá)水平，其下游的pSmad2/3蛋白表達(dá)水平也得到相應(yīng)的改善。因此，筆者有理由相信，UCG可能在體內(nèi)多靶點(diǎn)地干預(yù)了TGFβ1，SnoN，pSmad2/3以及Smad7等關(guān)鍵信號(hào)分子表達(dá)而負(fù)向調(diào)節(jié)TGFβ1/Smads信號(hào)通路的活性。

總之，UCG可能在體內(nèi)多靶點(diǎn)地調(diào)控TGFβ1/SnoN/Smad信號(hào)通路，從而減少ECM合成，延緩腎衰竭進(jìn)展。當(dāng)然，對(duì)于腺嘌呤灌胃聯(lián)合UUO誘導(dǎo)的腎衰竭模型，筆者只是發(fā)現(xiàn)UCG的作用和機(jī)制與TGFβ1/SnoN/Smad信號(hào)通路有關(guān)，但是，其治療靶點(diǎn)究竟是哪些信號(hào)分子，其調(diào)節(jié)機(jī)制是影響信號(hào)分子本身的活性，還是干預(yù)信號(hào)分子之間的結(jié)合？這些問題還沒有明確答案。

[致謝] 本課題得到南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院檢驗(yàn)科羅潯陽副主任技師和科技處張樂助理研究員的幫助和指導(dǎo)。

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