序言：寫作是分享個人見解和探索未知領(lǐng)域的橋梁，我們?yōu)槟x了8篇的減肥健身計劃樣本，期待這些樣本能夠為您提供豐富的參考和啟發(fā)，請盡情閱讀。

第1篇

【關(guān)鍵詞】 水飛薊素 腎小管間質(zhì)纖維化 腎小管上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化 轉(zhuǎn)化生長因子-β1

【Abstract】 Objective To explore the effect of silymarin on epithelial-mesenchymal transition (EMT) in rats with tubulointerstitial fibrosis induced unilateral ureteral obstruction. Methods 56 Sprague-Dawley rats were randomly pided into three groups: operated group(n=24)， silymarin treated group（n=24）and sham-operated group(n=8).Renal tubulointerstitial fibrosis model was established via unilateral ureteral obstruction(UUO). In operated group and treated group， eight rats were killed at the 7d， 14d and 21d after operation to examine the histological changes of renal tissue， but all 8 rats in sham-operated group were only killed at 21d. Histological changes were observed in tubulointerstitial injury under microscope.The expression of transforming growth factor- beta1（TGF-β1）and α-smooth muscle action(α-SMA) in renal tissue were determined with immunohistochemical method， respectively. Results Renal interstitium injury was seen in operated group and treated group at day 7，and became aggravating after day 7. The degree of renal tubulointerstitial fibrosis in rats from treated group was lighter than that of operated group at day 7， 14， 21(P

【Key words】 Silymarin tubulointerstitial fibrosis epithelial- mesenchymal transition transforming growth factor- beta1

腎小管上皮損傷引起小管上皮-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（EMT）在腎間質(zhì)纖維化進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。這個過程受許多因素影響，其發(fā)展機制涉及許多方面。近年來研究表明轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF -β1）在EMT進(jìn)程中具有重要的促進(jìn)作用[1]。本文旨在探討應(yīng)用水飛薊素能否防止腎小管間質(zhì)纖維化及可能機制。現(xiàn)報道如下:

1 材料與方法

1.1 動物模型及分組

選用3月齡SD大鼠56只，體重200～250g，購自新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院動物中心。大鼠適應(yīng)環(huán)境1周后，隨機分為：梗阻組（24只）、治療組（24只）、假手術(shù)組（8只）。大鼠行氯胺酮50mg/kg麻醉，取左旁正中切口剪開腹壁，以4號手術(shù)線將左輸尿管近端兩處結(jié)扎。假手術(shù)組同樣處理但不結(jié)扎。其中治療組于術(shù)前30分鐘開始給予水飛薊素30mg/kg灌胃，每日一次；假手術(shù)組和梗阻組給予等量生理鹽水灌胃處理。UUO大鼠于術(shù)后第7天、14天、21天隨機收獲8只，假手術(shù)組于第21天一次處死。取腎臟，10％多聚甲醛固定。光鏡下觀察腎組織的病理變化和免疫組織化學(xué)法檢測腎臟TGF-β1及α-SMA的表達(dá)情況。實驗過程中梗阻組第14天、21天時間點各死亡大鼠1只。

1.2 腎臟組織病理

腎組織切片進(jìn)行HE染色和Masson染色，光鏡下觀察。在IDA-2000高清晰度數(shù)碼纖維圖像分析系統(tǒng)下計算腎小管間質(zhì)纖維化相對面積。高倍鏡（×200）下每張切片隨機選取10個不重疊視野測定小管間質(zhì)纖維化面積與同視野小管間質(zhì)總面積的百分比，進(jìn)行半定量評分[2]，取其平均積分為每張切片評分。評分標(biāo)準(zhǔn)：0分：無病變；1分：50％。

1.3 免疫組化

采用SABC法檢測腎組織中的TGF-β1和α-SMA，操作步驟按SABC試劑盒說明書進(jìn)行。光鏡下組織切片呈棕黃色顆粒性沉積區(qū)域為陽性染色部位。高倍鏡（×200）下在每張不包含腎小球和血管的腎小管間質(zhì)區(qū)域隨機選取10個不重疊的視野，應(yīng)用IDA-2000高清晰度數(shù)碼圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像采集，經(jīng)灰度變換將陽性染色區(qū)域面積與該視野總面積百分比，計算平均值作為該樣本的百分比值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

各組數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（

）表達(dá)，組間差異采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗法。由SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。

2 結(jié)果

2.1 腎臟組織病理改變

光鏡下假手術(shù)組大鼠腎組織無病理改變。UUO術(shù)后梗阻組和治療組大鼠腎臟病理改變均明顯加重趨勢。實驗第7天時，梗阻組和治療組大鼠腎間質(zhì)大量炎癥細(xì)胞浸潤、水腫，腎小管明顯擴張，部分小管內(nèi)見大量細(xì)胞管型，腎小管上皮細(xì)胞胞漿疏松、濁腫和空泡變性。14天時，2組大鼠腎間質(zhì)彌漫性炎癥細(xì)胞浸潤，間質(zhì)面積進(jìn)一步增寬，腎小管明顯擴張，部分小管內(nèi)仍見大量細(xì)胞管型，腎小管上皮細(xì)胞腫脹、空泡變性，間質(zhì)出現(xiàn)輕度纖維化。21天時，2組病變繼續(xù)加重，腎間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤減少，大部分腎小管脫落壞死、萎縮、消失，殘余腎小管明顯擴張，上皮腫脹，空泡變性， 間質(zhì)纖維化明顯。治療組各觀察時間點腎臟病理變化明顯較梗阻組減輕（P

2.2 腎組織免疫組化變化

假手術(shù)組腎組織微量表達(dá)TGF-β1，主要位于腎小球系膜和上皮細(xì)胞，小管主要表達(dá)于遠(yuǎn)曲小管;梗阻組和治療組腎組織表達(dá)TGF-β1隨病情進(jìn)展而逐漸增強，遍布皮髄質(zhì)損傷的腎小管，除腎小管上皮細(xì)胞有陽性表達(dá)外，增殖的單核巨噬細(xì)胞亦有表達(dá)。各觀察時間點治療組均較梗阻組減少(P

假手術(shù)組以血管作為自身陽性內(nèi)參照，腎小球、腎小管和間質(zhì)細(xì)胞均未α-SMA表達(dá)。UUO大鼠術(shù)后第7天時腎間質(zhì)既有大量表達(dá)，14天時表達(dá)顯著增加，陽性信號彌漫分布，高峰持續(xù)至21天實驗結(jié)束。各觀察時間點治療組腎臟組織均較梗阻組減少(P

2.3 相關(guān)性分析 TGF-β1表達(dá)量與腎小管間質(zhì)損傷評分、α-SMA表達(dá)量均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.914、0.971，P

3 討論

單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）誘導(dǎo)腎小管間質(zhì)纖維化模型主要造成腎小管損傷，伴有炎癥細(xì)胞浸潤，并在較短時間內(nèi)發(fā)展為小管間質(zhì)纖維化，是目前研究腎小管間質(zhì)損傷較理想的模型之一[3]。本文采用UUO大鼠模型中的梗阻腎臟損害以小管間質(zhì)為主，伴有較多的炎癥細(xì)胞浸潤及進(jìn)行性纖維化，符合UUO模型的一般特點，表明動物模型的構(gòu)建是成功的。

水飛薊素是從水飛薊植物提取的混合物，是一種黃酮醇類化合物，主要含水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊醇等。水飛薊素作為一種傳統(tǒng)藥物廣泛用于防治肝臟纖維化。它主要通過下調(diào)TGF-β1在肝內(nèi)的表達(dá)，改變肝枯否細(xì)胞的功能，抑制炎癥反應(yīng)，有效阻止肝纖維化[4]。目前研究發(fā)現(xiàn)腎小管間質(zhì)纖維化與肝纖維化的機制相同。那么，水飛薊素是否也能延緩腎小管間質(zhì)纖維化呢？本實驗研究結(jié)果顯示：同梗阻組相比， 治療組各觀察時間點腎臟病理變化明顯減輕，腎小管間質(zhì)纖維化程度亦減輕。提示水飛薊素可有效減輕腎小管間質(zhì)纖維化。

腎小管間質(zhì)纖維化（TIF）幾乎是所有慢性腎臟疾病進(jìn)行性發(fā)展的共同通路，是導(dǎo)致終末期腎病(ESRD)的主要病理基礎(chǔ)[5]。腎小管間質(zhì)纖維化確切機制目前尚不清楚，其中一個重要機制就是肌成纖維細(xì)胞(Myof)增多及活化。Myof 是間質(zhì)中合成細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的主要細(xì)胞，而細(xì)胞外基質(zhì)的增多直接導(dǎo)致了TIF的進(jìn)行性發(fā)展。目前Myof的來源還不完全明確，近年研究發(fā)現(xiàn)除了由成纖維細(xì)胞活化而來，還有相當(dāng)一部分來源于腎小管上皮細(xì)胞[6]，有學(xué)者報告在腎纖維化的發(fā)生過程中，36％的新增纖維細(xì)胞來源于腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化[7]。α-SMA是MyoF的重要標(biāo)志，可以用來觀測腎臟損傷時間質(zhì)纖維化的病理進(jìn)程[8]。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)組α-SMA僅表達(dá)于血管平滑肌肌層，UUO各組大鼠腎組織表達(dá)的α-SMA隨病情進(jìn)展而持續(xù)升高。梗阻組明顯高于治療組（P

參 考 文 獻(xiàn)

[1] Stahl PJ， Felsen D. Transforming growth factor-beta， basement membrane， and epithelial-mesenchymal transdifferentiation: implications for fibrosis in kidney disease. Am J Pathol ， 2001，159: 1187-92.

[2] Mezzano SA， Droguett MA， Burgos ME， et al. Overexpression of chemokines fibrogenetic cytokines and myofibroblasts in human membranous nephropathy. Kidney Int 2000， 57:147-58.

[3] Klahr S， Morrissey J.Obstructive nephropathy and renal fibrosis.Am J Physiol Renal Physiol， 2002， 283(5):F861-75.Review.

[4] Jeong DH， Lee GP， Jeong WI， et al. Alterations of mast cells and TGF-beta1 on the silymarin treatment for CCl4-induced hepatic fibrosis.World J Gastroenterol. 2005， 11(8):1141-8.

[5] Gerth JH， Kriegsmann J， Trinh TT， et al. Induction of p27KIP1 after unilateral ureteral obstruction is independent of angiotensinⅡ. KidneyInt， 2002， 61(1):68-79.

[6] Liu YH. Epithelial to mesenchymal transition in renal fibrogenesis: pathologic significance， molecular mechanism， and therapeutic intervention. J Am Soc Nephrol， 2004， 15(1): 1-12.

[7] 李慧凜，周秋根，鄭法雷.腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的概念與病理過程。世界醫(yī)學(xué)雜志，2004，8（1）：34－35.

第2篇

1 非現(xiàn)場審計的作用及特點

(1) 提高了審計及時性。非現(xiàn)場審計借助計算機和網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，可以實時獲取業(yè)務(wù)系統(tǒng)有效的數(shù)據(jù)信息，通過設(shè)置預(yù)警標(biāo)準(zhǔn)能夠做到實時動態(tài)監(jiān)測，實現(xiàn)對風(fēng)險的早期控制，為管理層提供預(yù)警信號。為現(xiàn)場審計提供資料和線索，最大限度地提高審計工作的效率和質(zhì)量，為領(lǐng)導(dǎo)決策提供支持。

(2) 拓寬了審計覆蓋面。建設(shè)銀行近年來資產(chǎn)規(guī)模增長迅速，新的金融產(chǎn)品和服務(wù)不斷推出，業(yè)務(wù)的復(fù)雜程度大大提高，使審計的復(fù)雜程度也相應(yīng)提高，審覆蓋面廣度加大。在現(xiàn)有審計資源的條件下，單純依靠傳統(tǒng)的審計方式和手工作業(yè)模式難以保障審計監(jiān)督所必須達(dá)到的廣度和深度。而非現(xiàn)場審計依托高科技手段，可以遠(yuǎn)程調(diào)集所屬機構(gòu)的有關(guān)業(yè)務(wù)數(shù)據(jù)并進(jìn)行監(jiān)測，有助于全面把握分支機構(gòu)和各項業(yè)務(wù)的風(fēng)險狀況。

(3) 降低審計成本，提高審計質(zhì)量和效率。一是節(jié)約審計成本。非現(xiàn)場審計模式下，審計組除了必要的現(xiàn)場調(diào)查和現(xiàn)場溝通外，可以大大減少審計人力費用、差旅費用和時間費用。二是減少了調(diào)閱資料時間。非現(xiàn)場審計模式下，審計數(shù)據(jù)的采集主要通過固定的審計數(shù)據(jù)采集接口來獲得，避免了現(xiàn)場審計中依賴被審計單位提供數(shù)據(jù)，使內(nèi)部審計具有前所未有的主動性和靈活性。三是提高審計效率，增加審計價值。非現(xiàn)場審計是從定量分析到定性分析的過程，分析性復(fù)核方法貫穿于非現(xiàn)場審計的全過程，增強了審計人員的理性思維，可以避免重復(fù)勞動和無效勞動，規(guī)避審計風(fēng)險，提高審計質(zhì)量，使現(xiàn)場審計更具針對性，并且可以有效地解決審計資源不足與審計任務(wù)繁重的矛盾。

2 目前商業(yè)銀行開展非現(xiàn)場審計存在的問題

目前，商業(yè)銀行內(nèi)部審計方式仍然是以現(xiàn)場審計為主，而非現(xiàn)場審計的手段沒有得到充分的發(fā)揮，不能滿足業(yè)務(wù)發(fā)展的需要。信息化、網(wǎng)絡(luò)化和專業(yè)技術(shù)化程度依然偏低，非現(xiàn)場審計發(fā)展存在一些薄弱環(huán)節(jié)，主要表現(xiàn)在：

(1) 未建立起一套科學(xué)、完整的非現(xiàn)場審計管理辦法和操作規(guī)程。進(jìn)一步推動非現(xiàn)場審計工作尚未進(jìn)入系統(tǒng)性規(guī)劃階段，如在非現(xiàn)場審計發(fā)展推動模式上缺少完整的規(guī)劃、目標(biāo)和具體措施；非現(xiàn)場審計推進(jìn)缺少組織保障，沒有明確的職責(zé)分工，缺少科學(xué)的領(lǐng)導(dǎo)、決策和協(xié)調(diào)；非現(xiàn)場審計的制度規(guī)章、操作流程尚屬空白。

(2) 熟悉非現(xiàn)場審計技術(shù)的人員嚴(yán)重不足，致使非現(xiàn)場技術(shù)應(yīng)用程度不高。非現(xiàn)場審計系統(tǒng)對使用人員的綜合素質(zhì)要求較高（操作處于半編程狀態(tài)），全面系統(tǒng)掌握非現(xiàn)場審計技術(shù)的人員匱乏，僅有少數(shù)審計人員熟悉數(shù)據(jù)源結(jié)構(gòu)，系統(tǒng)操作熟練，能夠編制審計模型，這些同志一般都有較深的技術(shù)背景（原科技人員）。大多數(shù)的審計專業(yè)人員尚不能熟練運用非現(xiàn)場審計技術(shù)。非現(xiàn)場審計技術(shù)本應(yīng)是全體審計人員的必備工具，僅有少數(shù)人掌握，有違引進(jìn)非現(xiàn)場審計技術(shù)的初衷。

(3) 非現(xiàn)場審計僅作為現(xiàn)場審計的輔助手段，仍然是在非現(xiàn)場審計分析初步篩選疑點的基礎(chǔ)上確定抽樣樣本后到現(xiàn)場查證確認(rèn)的模式。非現(xiàn)場審計技術(shù)應(yīng)用未能有效減少審計項目所需的審計資源量，同時，大量的現(xiàn)場審計作業(yè)也勢必對業(yè)務(wù)經(jīng)營造成不利的影響。

3 商業(yè)銀行如何有效拓展非現(xiàn)場審計的途徑

(1) 健全管理制度，落實發(fā)展目標(biāo)。提高認(rèn)識，落實發(fā)展目標(biāo)，制定整體規(guī)劃，建立健全非現(xiàn)場審計制度，保證非現(xiàn)場審計有章可循，保證數(shù)據(jù)的收集、加工、分析、報告和處理有條不紊，保證所有的現(xiàn)場審計建立在非現(xiàn)場審計的基礎(chǔ)上。

第3篇

【摘要】 目的: 觀察Smad6和Smad7基因能否抑制TGFβ誘導(dǎo)腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化。方法: 構(gòu)建產(chǎn)生表達(dá)Smad6和Smad7基因的無輔毒腺相關(guān)病毒載體， 再將病毒顆粒分別轉(zhuǎn)染入人腎小管上皮細(xì)胞（HKC）， 細(xì)胞隨機分為正常對照、 TGFβ1組、 Smad7 組、 LacZ組、 TGFβ1+Smad7或Smad6組、 TGFβ1＋LacZ組。10 μg/L TGFβ1添加入培養(yǎng)液孵育15、 30、 60、 120 min和3 d。Western blot測定TGFβ1和Smad6或Smad7基因轉(zhuǎn)染對細(xì)胞pSmad2、 Ecadherin、 αsmooth muscle actin（αSMA）表達(dá)的影響， ELISA法測定培養(yǎng)上清羥脯氨酸的含量的變化， 倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。結(jié)果: 與未加TGFβ1細(xì)胞相比， 添加TGFβ1后15、 30、 60、 120 min胞內(nèi)Smad2磷酸化水平明顯增加， 30 min時表現(xiàn)最大。10 μg/L TGFβ1與HKC孵育72 h后， 細(xì)胞αSMA和羥脯氨酸量合成增加， Ecadherin表達(dá)減少; 細(xì)胞形態(tài)變長， 呈紡錘狀細(xì)胞， 失去鵝卵石樣的形狀。Smad7基因轉(zhuǎn)染可抑制TGFβ1誘導(dǎo)Smad2磷酸化， 抑制細(xì)胞αSMA和羥脯氨酸合成， 增加Ecadherin表達(dá)， 維持培養(yǎng)細(xì)胞的上皮樣形態(tài)， 相反， Smad6沒有這樣的作用。結(jié)論: Smad7而不是Smad6基因轉(zhuǎn)染能抑制TGFβ1誘導(dǎo)腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化， 這些作用可能與Smad7阻斷Smad2磷酸化有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 Smad7; Smad6; 上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化; TGFβ; 基因治療

腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化（epithelial mesenchymal transition， EMT）是腎小管間質(zhì)纖維化(Tubulointerstitial fibrosis， TIF)發(fā)生的重要原因之一， 超過1/3的間質(zhì)成纖維細(xì)胞來源于EMT， 因此， 尋找減緩EMT的方法是TIF研究的重點［1， 2］。TGFβ是EMT的重要誘導(dǎo)劑之一， 減少其對小管上皮的影響可能對TIF治療有幫助。Smad6和Smad7蛋白是TGFβ家族細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)調(diào)控蛋白（InhibitorySmads， ISmad）［3］。ISmads能與活化的TGFβⅠ型受體牢固結(jié)合， 阻止Smad2和Smad3磷酸化， 未磷酸化的Smad2和Smad3不能形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物進(jìn)入核內(nèi)， 從而阻斷了TGFβ對靶基因的轉(zhuǎn)錄。我們以往的研究發(fā)現(xiàn)Smad6和Smad7表達(dá)下調(diào)可能是TGFβ 高表達(dá)致TIF的主要原因， 但提高它們的表達(dá)能否抑制TGFβ誘導(dǎo)的EMT尚不清楚［4］。為此， 我們采用腺相關(guān)病毒將Smad6和Smad7基因分別轉(zhuǎn)染入人腎小管細(xì)胞中， 觀察其能否抑制TGFβ誘導(dǎo)的EMT， 并分析其細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。

1 材料和方法

1.1 材料 限制性核酸內(nèi)切酶BamH I、 Xho I及T4連接酶， 均購自TaKaRa公司。Wizard PlusSV Minipreps DNA Purification System和Wizard PureFectionPlasmid DNA Purification System質(zhì)粒提取試劑盒和膠回收試劑盒， 均購自Promega公司。TGFβ1和兔抗Flag M2抗體購自Sigma公司， 兔抗phosphoSmad2抗體購自upstate biotechnology公司， 兔抗αSMA抗體購自Dako公司， 兔抗Ecadherin抗體購自B＆D公司。AAV HelperFree System（pAAVMCS vector、 pAAVLacZ vector、 pAAVRC plasmid、 pHelper plasmid）和XL10Gold感受態(tài)細(xì)菌， 購自Stratagene公司。E.coli DH5α由本校分子遺傳教研室饋贈。含全長Smad6/Flag和Smad7/Flag融合基因表達(dá)質(zhì)粒， 由瑞典Serhiy Souchelnytskyi博士惠贈。HEK 293和HKC細(xì)胞購自美國ATCC。

1.2 方法

1.2.1 Smad6和Smad7 AAV的產(chǎn)生及鑒定 首先將Smad6/Flag和Smad7/Fla段從質(zhì)粒pcDNA3中用EcoR I/BamH I雙酶切出， 再克隆到pAAVMCS vector質(zhì)粒的多克隆位點， 正式命名為pAAVSmad6/Flag和pAAVSmad7/Flag質(zhì)粒。按Stratagene公司AAV HelperFree System轉(zhuǎn)染試劑盒以磷酸鈣沉淀的方法產(chǎn)生Smad6和Smad7 AAV。以1 mL病毒儲存液感染HKC細(xì)胞48 h后表達(dá)轉(zhuǎn)移基因陽性細(xì)胞數(shù)（SABC組化）來計算。

1.2.2 HKC細(xì)胞的培養(yǎng)及實驗分組 HKC細(xì)胞用含100 mL/L的胎牛血清， 100 U/mL青霉素、 100 mg/L鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液傳代培養(yǎng)， 培養(yǎng)條件為37℃、 50 mL/L CO2。細(xì)胞隨機分為正常對照、 TGFβ1組、 Smad7 組、 LacZ組、 TGFβ1+Smad7或Smad6組、 TGFβ1＋LacZ組。實驗分三步驟進(jìn)行， 第一步觀察10 μg/L TGFβ1對HKC細(xì)胞磷酸化Smad2水平的影響， 時相點設(shè)為0、 15、 30、 60、 120 min; 第二步觀察不同AAV滴度ISmad轉(zhuǎn)染HKC對TGFβ1誘導(dǎo)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響， 時相點為72 h。

1.2.3 Western bot 分析 細(xì)胞經(jīng)PBS沖洗后， 加入RIPA裂解液（10 g/L Nonidet P40， 50 mmol/L TrisHCl， 150 mmol/L NaCl， 2 mmol/L EDTA， 1 mL/L SDS， 10 mL/L TritonX100， PMSF 50 mg/L， Leuptin 5 mg/L）30 min勻漿提取蛋白， 4℃ 12 000 g離心20 min， 取上清以Micro BCA protein Kit 測定蛋白質(zhì)含量。取等量蛋白質(zhì)經(jīng)煮沸5 min后行SDSPAGE垂直凝膠電泳， 電轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)到PVDF膜上， 膜在50 mL/L牛血清白蛋白TBST液（10 mmol/L Tris·HCl， 150 mmol/L NaCI， 0.5 mL/L Tween20， pH8.0）封閉， 37℃室溫1 h， TBST洗膜后分別與不同一抗AntiphosphoSmad2（1∶1 000）、 Ecadherin（1∶1 000）， αsmooth muscle actin（1∶1 000）、 β actin（1∶1 000）抗體孵育37℃， 2 h， 依次再用生物素標(biāo)記的二抗雜交和辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素液孵育， 37℃， 1 h， TBST洗膜后在暗室中加ECL發(fā)光試劑， X光膠片下曝光， 常規(guī)方法顯影、 定影， 直至顯影出電泳帶。使用Bio Rad 5000圖像系統(tǒng)采集電泳圖像， Verso Doc軟件檢測蛋白質(zhì)條帶的吸光度（A）值， 以β actin為內(nèi)參照進(jìn)行半定量分析。

1.2.4 培養(yǎng)上清中羥脯氨酸的含量 嚴(yán)格按試劑盒說明書方法操作， 用M550型酶標(biāo)儀在550 nm處檢測A值， 通過下列公式計算樣品中羥脯氨酸含量。樣品中羥脯氨酸濃度(mg/L)=(測定管A值-空白管A值)/(標(biāo)準(zhǔn)管A值-空白管A值)。

1.2.5 培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化 觀察正常對照組， TGFβ1組， TGFβ1+Smad7組， TGFβ1+Smad7組細(xì)胞的形態(tài)變化。

1.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析 實驗數(shù)據(jù)以x±s表示， 用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行組間方差分析， P

2 結(jié)果

2.1 重組AAV的產(chǎn)生及病毒滴度 分別取10 μg的質(zhì)粒pAAVLacZ或pAAVSmad6/Flag或pAAVSmad7/Flag和各10 μg的 pAAVRC和pHelper質(zhì)粒經(jīng)磷酸鈣沉淀法共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞后2～3 d。pAAVLacZ轉(zhuǎn)染組經(jīng)原位βGalactosidase 染色細(xì)胞后可見細(xì)胞呈藍(lán)色。轉(zhuǎn)染Smad6和Smad7 AAV的細(xì)胞， 約90％以上的腎小管上皮細(xì)胞可有效表達(dá)Smad6和Smad7蛋白， 染色后可見陽性細(xì)胞呈棕色。平均病毒病毒滴度分別為rAAVlacZ 2×1010 IU/mL， pAAVSmad6/Flag 3×1010 IU/mL， pAAV Smad7/Flag 3×1010IU/mL（圖1）。

2.2 TGFβ1和ISmad基因轉(zhuǎn)染對pSmad2的表達(dá)的影響 Western blot結(jié)果顯示， HKC細(xì)胞和TGFβ1孵育0、 15、 30、 60、 120 min后， 細(xì)胞pSmad2水平增加， 其作用在30～60 min時表現(xiàn)最大， 表明TGFβ1可誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)Smad2磷酸化（圖2）。

1×1010滴度Smad7基因轉(zhuǎn)染HKC后30 min， Western blot結(jié)果顯示Smad7基因轉(zhuǎn)染可抑制TGFβ1誘導(dǎo)的Smad2磷酸化水平， 而Smad6基因轉(zhuǎn)染不能抑制TGFβ1誘導(dǎo)的Smad2磷酸化（圖3、 4）。

2.3 ISmad基因轉(zhuǎn)染對TGFβ誘導(dǎo)腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響 Western結(jié)果顯示， 10 μg/L TGFβ1處理HKC細(xì)胞后72 h， 與正常對照組相比， 細(xì)胞αSMA表達(dá)增加， 而Ecadherin表達(dá)減少。與TGFβ1組相比， TGFβ1＋Smad7組細(xì)胞αSMA減少， Ecadherin表達(dá)明顯增加。TGFβ1＋Smad6組αSMA、 Ecadherin表達(dá)均無明顯變化， 表明Smad7基因轉(zhuǎn)染可拮抗TGFβ1誘導(dǎo)腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化， 而Smad6沒有這樣的作用(圖5～8)。

2.4 ISmad基因轉(zhuǎn)染對培養(yǎng)上清中羥脯氨酸的含量的影響 ELISA結(jié)果顯示， 10 μg/L TGFβ1處理HKC細(xì)胞后72 h， 與正常對照組（3.37±0.41)mg/L相比， 細(xì)胞培養(yǎng)上清中羥脯氨酸的含量（6.12±0.55) mg/L明顯增加。與TGFβ1組相比， TGFβ1＋Smad7組細(xì)胞上清羥脯氨酸的含量（4.15±0.46)mg/L明顯降低， 而Smad6組（6.15±0.56)mg/L無明顯變化， 表明Smad7基因轉(zhuǎn)染可拮抗TGFβ1誘導(dǎo)腎小管羥脯氨酸的合成， 而Smad6沒有這樣的作用。

2.5 培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化 10 μg/L TGFβ1作用72 h后細(xì)胞形態(tài)變長， 呈紡錘狀細(xì)胞， 失去鵝卵石樣的形狀， 表明腎小管細(xì)胞向肌纖維細(xì)胞形狀轉(zhuǎn)變。與TGFβ1組相比， TGFβ1＋Smad7組細(xì)胞能維持上皮樣形態(tài)， 而TGFβ1＋Smad6組細(xì)胞不能維持上皮樣形態(tài)， 呈紡錘狀細(xì)胞(圖9)。

3 討論

TIF是各種腎臟疾病進(jìn)展至腎衰竭的共同通路， 減緩TIF的進(jìn)展一直是慢性腎病治療的重點之一［5］。TIF主要表現(xiàn)為小管細(xì)胞消失和間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的堆積。ECM主要由纖維連接蛋白和膠原蛋白組成。盡管腎小管細(xì)胞能合成部分ECM， 但肌成纖維細(xì)胞是ECM的主要來源。研究表明， 肌成纖維細(xì)胞的來源可能有: ①腎間質(zhì)固有成纖維細(xì)胞; ②腎髓源性干細(xì)胞; ③EMT， 其中EMT是腎臟纖維化中肌成纖維細(xì)胞的主要來源， Iwano等［2］報道大約36％的肌成纖維細(xì)胞來源于腎臟局部EMT。因此， 探討EMT成因和阻斷措施對減緩TIF的進(jìn)展具有重要意義。本研究結(jié)果顯示， HKC細(xì)胞和TGFβ1孵育0、 15、 30、 60、 120 min后， 細(xì)胞pSmad2水平增加， 說明TGFβ通過Smad2的磷酸化實現(xiàn)其胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。Smads蛋白是TGFβ細(xì)胞內(nèi)的主要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白， TGFβ首先與其II型受體結(jié)合， 活化的II型受體蛋白激酶使I型受體磷酸化， 活化的I型受體蛋白激酶作用于Rsmads(Smad2， 3)， 使其磷酸化， 隨后Smad2， 3與4形成異源寡聚體復(fù)合物， 移入核內(nèi)， 在核內(nèi)其與目的基因啟動子區(qū)的Smads反應(yīng)元件結(jié)合， 啟動基因轉(zhuǎn)錄， 包括膠原基因、 ISmad基因等。Ellis等［6］發(fā)現(xiàn)I， III 和V膠原基因均含有Smad2， 3， 4的結(jié)合位點。PAI1基因啟動子740和647位點存在有TGFβ反應(yīng)元件， 活化的Smad形成的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物與此元件結(jié)合后， 可增強PAI1基因的轉(zhuǎn)錄［7］， 由此影響纖溶酶原/纖溶酶的活性。Hu等［8］還證實alphaSMA基因的啟動子中含有二個Smad3反應(yīng)區(qū)， Smad3可促進(jìn)αSMA的表達(dá)， 因此阻抑受體活化的Smad(Smad2， 3)磷酸化， 是減弱TGFβ信號， 控制EMT的關(guān)鍵。Smad6和Smad7蛋白是TGFβ家族細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)調(diào)控蛋白。TGFβ活化I型受體同時也激活I(lǐng)Smad， Smad7通過與Smad2和Smad3競爭性結(jié)合I型受體， 抑制其磷酸化并干預(yù)核內(nèi)功能性SmadDNA的形成［9］; 另一方面Smad7還可與smurfl/2結(jié)合， 通過泛素化途徑降解I型受體， 對TGFβ細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行負(fù)反饋調(diào)節(jié)［10］。Smad6主要負(fù)調(diào)控蛋白骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）和部分TGFβ的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)［11］。既往我們建立單側(cè)輸尿管梗阻性腎病腎小管間質(zhì)纖維化模型， 發(fā)現(xiàn)Smad6和Smad7表達(dá)下調(diào)可能是TGFβ 高表達(dá)致TIF的主要原因， 但提高它們的表達(dá)能否抑制TGFβ誘導(dǎo)的EMT尚不清楚。本研究結(jié)果顯示， Smad7基因轉(zhuǎn)染可抑制TGFβ1誘導(dǎo)Smad2磷酸化， 而Smad6基因轉(zhuǎn)染不能抑制TGFβ1誘導(dǎo)的Smad2磷酸化， 說明Smad2磷酸化只受Smad7調(diào)控。Smad6不具有這樣的作用， 我們分析這可能與Smad6主要影響Smad1和Smad5的磷酸化［12］， 參與調(diào)控BMP信號通路作用有關(guān)。Zhao等［13］發(fā)現(xiàn)Smad7而不是Smad6可抑制TGFβ誘導(dǎo)的胚胎肺的形態(tài)發(fā)生; HillKapturczak等［14］還證實Smad7而不是Smad6可抑制TGFβ對腎小管細(xì)胞血紅素加氧酶的抑制．因此， 控制Smad2的活化可能是Smad7減弱TGFβ信號的分子機制基礎(chǔ)。

從ECM產(chǎn)生這個角度來看， 激活產(chǎn)生ECM的效應(yīng)細(xì)胞被認(rèn)為是腎臟纖維化的核心。研究已經(jīng)揭示肌成纖維細(xì)胞是ECM的主要來源， 腎臟纖維化中肌成纖維細(xì)胞的主要來源于EMT［2， 5］。腎小管發(fā)生EMT時主要表現(xiàn)以下特點: ①細(xì)胞極性消失; ②細(xì)胞Ecadherin表達(dá)受抑制和緊密連接消失; ③表達(dá)波形纖維蛋白; ④表達(dá)αSMA。其中Ecadherin是上皮細(xì)胞的標(biāo)記分子， 對維持上皮細(xì)胞間緊密連接， 穩(wěn)定上皮細(xì)胞表型具有重要的作用， αSMA是MFB的標(biāo)記分子［15］。倒置顯微鏡觀察10 μg/L TGFβ1作用72 h后細(xì)胞形態(tài)變長， 呈紡錘狀細(xì)胞， 失去鵝卵石樣的形狀， 表明腎小管細(xì)胞向纖維細(xì)胞形狀轉(zhuǎn)變。Smad7基因轉(zhuǎn)染可抑制TGFβ1誘導(dǎo)的Ecadherin表達(dá)下降和αSMA表達(dá)增加， 降低培養(yǎng)上清中羥脯氨酸的含量， HKC能維持上皮樣形態(tài)， 向纖維細(xì)胞形狀轉(zhuǎn)變不明顯， 而Smad6轉(zhuǎn)染組不具有這樣的作用， 說明Smad7基因轉(zhuǎn)染可抑制TGFβ誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化， 從而減少肌成纖維細(xì)胞的數(shù)目， 最終減輕腎小管間質(zhì)纖維化。

總之， Smad7基因轉(zhuǎn)染可抑制TGFβ誘導(dǎo)的腎小管細(xì)胞上皮－間充質(zhì)的轉(zhuǎn)分化， 其作用途徑可能是通過抑制Smad2磷酸化， 干預(yù)下游Smad介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)， 維持Ecadherin表達(dá)， 減少αSMA表達(dá)， 降低細(xì)胞合成ECM蛋白有關(guān)， 而Smad6基因轉(zhuǎn)染不具有這樣的作用。

參考文獻(xiàn)

［1］ Burns WC， Kantharidis P， Thomas MC. The role of tubular epithelialmesenchymal transition in progressive kidney disease［J］. Cells Tissues Organs， 2007， 185(1-3): 222-231.

［2］ Iwano M， Plieth D， Danoff TM， et al. Evidence that fibroblasts derive from epithelium during tissue fibrosis［J］. J Clin Invest， 2002， 110(3): 341-350.

［3］ Schmierer B， Hill CS. TGFbetaSMAD signal transduction: molecular specificity and functional flexibility［J］. Nat Rev Mol Cell Biol， 2007， 8(12): 970-982.

［4］ 黃云劍， 梁 莉， 楊唐俊. Smad 2， 3， 6， 7蛋白在實驗性腎間質(zhì)纖維化模型中的定位和表達(dá)變化［J］. 中華腎臟病雜志， 2002， 18(5): 356-360.

［5］ Mucsi I， Rosivall L. Epithelialmesenchymal transition in renal tubular cells in the pathogenesis of progressive tubulointerstitial fibrosis［J］. Acta Physiol Hung， 2007， 94(1-2): 117-131.

［6］ Ellis LR， Warner DR， Greene RM， et al. Interaction of Smads with collagen types I， III， and V［J］. Biochem Biophys Res Commun， 2003， 310(4): 1117-1123.

［7］ Stroschein SL， Wang W， Luo K. Cooperative binding of Smad proteins to two adjacent DNA elements in the plasminogen activator inhibitor1 promoter mediates transforming growth factor betainduced smaddependent transcriptional activation［J］. J Biol Chem， 1999， 274(14): 9431-9441.

［8］ Hall MC， Young DA， Waters JG， et al. The comparative role of activator protein 1 and Smad factors in the regulation of Timp1 and MMP1 gene expression by transforming growth factorbeta 1［J］. J Biol Chem， 2003， 278(12): 10304-10313.

［9］ Zhang S， Fei T， Zhang L， et al. Smad7 antagonizes transforming growth factor beta signaling in the nucleus by interfering with functional SmadDNA complex formation［J］. Mol Cell Biol， 2007， 27(12): 4488-4499.

［10］ Kavsak P， Rasmussen RK， Causing CG， et al. Smad7 binds to Smurf2 to form an E3 ubiquitin ligase that targets the TGF beta receptor for degradation［J］. Mol Cell， 2000， 6(6): 1365-1375.

［11］ Scharstuhl A， Diepens R， Lensen J， et al. Adenoviral overexpression of Smad7 and Smad6 differentially regulates TGFβmediated chondrocyte proliferation and proteoglycan synthesis［J］. Osteoarthritis Cartilage， 2003， 11(11): 773-782.

［12］ Takase M， Imamura T， Sampath TK， et al. Induction of Smad6 mRNA by bone morphogenetic proteins［J］. Biochem Biophys Res Commun， 1998， 244(1): 26-29.

［13］ Zhao J， Shi W， Chen H， et al. Smad7 and Smad6 differentially modulate transforming growth factor βinduced inhibition of embryonic lung morphogenesis［J］. J Biol Chem， 2000， 275(31): 23992-23997.

第4篇

身高：160cm

之前體重：112斤

目前體重：98斤

減重歷時：30天

馬拉松式的8年戀愛終于有了功德圓滿的結(jié)果：2007年10月5號，我，不漂亮也不難看的傻女孩Elle就要嫁給馬志剛了！

從確定婚期那天開始，我便緊繃神經(jīng)，全力以赴地應(yīng)對婚期的大小瑣事，布置新房、挑選禮服與喜帖……忙得不亦樂乎。

還記得那天和志剛?cè)ピ嚩Y服，我相中了一件魚尾式白色紗裙，穿上后在鏡子前左右環(huán)顧，鏡中的自己仿若童話中美麗的人魚公主?；仡^期待地看向志剛，等待著他的贊美?！班?，好看！”我的心有點飄飄然，但誰知他又補了一句：“不過，要是能再瘦點就好了?！绷r，我沮喪到極點。我知道志剛這么說是無意的，但還是深深地刺痛了我，從那一刻開始我痛下決心，一定要在婚前減掉身上多余的肉肉，讓穿上漂亮婚紗的自己成為志剛最引以為豪的美麗新娘。

8月26日，我開始了自己的目標(biāo)型減肥計劃。

離婚期還有近10天，我的減肥計劃正好滿一個月，站在體重稱上看著指針穩(wěn)穩(wěn)地停在49kg處，我的欣喜難以言表，一個月來減肥的辛苦與忍耐都在這一刻化為烏有，我甚至能夠想象得出，在甩掉了身上足足14斤贅肉之后，再穿上那件漂亮的魚尾式婚紗的自己會是多么的婀娜。

幸福是要與朋友一起分享的，因此，我首先想到與我一樣艱難行走在減肥路上的姐妹。我要將自己成功減肥的心得告訴她們，讓她們也能和我一樣實現(xiàn)瘦身夢想。

總結(jié)這一個月的減肥經(jīng)歷，我覺得有3點至關(guān)重要，有興趣就聽我慢慢說吧。

減肥關(guān)鍵1：飲食――少食多餐，均衡飲食

我曾經(jīng)有過幾次減肥經(jīng)歷，其中也有靠節(jié)食的，但由于克制力不夠，雖然體重有所減少，但很不穩(wěn)定，多吃一點就會反彈；而且那段時間的體質(zhì)很不好，臉色暗黃暗黃的，給人一副病怏怏的感覺。

減肥就是為了美，如果為“纖瘦美”而丟了“健康美”，豈不和扳苞谷的猴子沒什么兩樣？這樣一想，我便決定放棄。不過，那次經(jīng)歷給了我一些提醒，讓我在開始這次減肥之前就對自己的飲食做了調(diào)整。

清晨：空腹喝一杯白開水或清水。

早餐：中式早餐以營養(yǎng)的湯、米飯、青菜為主，外加雞肉或魚肉；西式的則以全麥面包、脫脂牛奶、煎蛋（但不放鹽）為主，配以蘋果或西紅柿等。如此豐盛卻完全不用擔(dān)心致胖，唯一需注意的就是要保證一次食量不能太多，以免把胃撐大。

加餐：一般在10～11點之間，主要是吃水果，比如1個蘋果或桃子、香蕉等。我個人認(rèn)為減肥期間營養(yǎng)一定要均衡，而且上午吃東西，身體吸收和消化能力都很強，新陳代謝速度快，不會囤積脂肪。

午餐：米飯和青菜。保持健康原則，吃飽但絕不吃撐。若在飯前半小時喝1大杯白開水，可避免午餐吃過量。

下午茶：一般1點上班時我會喝1杯濃濃的普洱茶，去脂兼提神；3點時我會喝1杯酸奶，健康養(yǎng)顏且利于消化，是不可或缺的下午茶；考慮到減肥的同時很可能會讓胸部也縮水，因此每天下午我還會喝1杯木瓜飲料，具體喝的時間不固定，但一定要在5點之前，以免多余熱量無法及時得到消耗。

晚餐：我一般很少吃。但如果要去健身，去之前我會喝1杯酸奶，再吃1個西紅柿或1根黃瓜，回來后我則會喝一些清淡的蔬菜湯。其實，晚餐的原則就是――吃得越早、越少會越好。謹(jǐn)記這一原則，并盡力遵守，你就會看到回報。

Point：想健康就要多喝水，但這一理論只適合白天。把人體1天所需的2～3升水全放在白天攝入，晚上8點之后就盡量不要喝水，要知道晚上喝太多水會導(dǎo)致身體浮腫，從而影響減重效果。

減肥關(guān)鍵2：運動――堅持就是勝利

我選擇去健身房做專業(yè)且有針對性的運動，以充分鍛煉全身每一個部位，如此瘦下來會比較均勻、有型。此外，健身房充滿激情的群體運動氛圍，能充分帶動人的運動興致，令人很輕松地燃燒掉更多脂肪。

狠下心花錢――

我先在一家條件不錯的健身中心辦了張年卡，費用總計4800元，之后又給自己買了套將近1000元的健身服，總計差不多是我年收入的1/10，對我來說算是大出血了，這么做只是希望代價不菲的健身卡和健身服能督促我堅持運動。聽朋友說，在昂貴的運動場所若自己不能堅持就會為花掉的錢倍感心疼，以此來達(dá)到運動目的。聽說這種方法百試不爽，再懶的女生都會堅持，總之我自己就是因心疼花掉的錢才堅持下來的，哈哈。

健身房甩脂先苦后甜――

每周我會去健身房3次，以快走和器械練習(xí)為主。

快走：我個人認(rèn)為它是一項非常好且容易堅持下來運動。如果換成跑步，對我來說就有些難度，而且像跑步這種過于激烈的運動若一次持續(xù)過長時間，會對膝關(guān)節(jié)和腳踝造成強烈的沖擊。

每次快走我會堅持60～75分鐘，而為加大運動量以及增添樂趣，我會選擇性地變換快走節(jié)奏，前10～15分鐘以5公里/小時的速度走，接下來的15～20分鐘以6公里/小時的速度走，之后的20～30分鐘以6.5～7公里/小時的速度走，最后的10～15分鐘步率逐漸降低，以約4.5公里/小時的速度走，這樣有急有緩，運動起來不會覺得太累。此外，如果你喜歡跳舞，快走時還可踩著健身房里舞曲的鼓點，優(yōu)美的身姿可會為你贏來不少帥哥的矚目。

器械練習(xí)：這種練習(xí)主要是針對手臂、腹部、腿部和臀部等重點部位，相對來說比較專業(yè)，運動時最好請健身教練有指對性地為你設(shè)計最佳的練習(xí)方式。我個人感覺，器械練習(xí)重量越輕越好，只要做的次數(shù)多一些就可以了。

跳操：這其實是最適合女性減肥的好運動，不過由于我去的那家健身房跳操班的人實在太多，我又天生不愛湊熱鬧，便只好放棄。

Point：不管選擇什么運動項目，最后都要做足拉伸運動，再做一定時間的按摩，尤其是腿部，它能幫助你保持優(yōu)美的身體線條。

減肥關(guān)鍵3：心態(tài)――減肥是生活中最自然的一部分

“胖”不僅意味著體內(nèi)污物排出不徹底、新陳代謝緩慢，同時還會給人以倦怠不精神的印象。年輕的身體應(yīng)該是健康且充滿活力的，因此，選擇減肥不僅是一種積極面對生活的態(tài)度，更是追求健康與青春的本能需要。它不是否定原來的自己，而是要讓原來的自己更加完美。

第5篇

1、堅持跑步。由于飲食不規(guī)律，導(dǎo)致身體長胖，想快速減肥。最簡單也是最方便的一個方法就是跑步，由于每個人的身體體質(zhì)不同，可以選擇慢跑，也可以選擇慢走，快走，總之需要意志堅定，每天去堅持，就會有很明顯的效果。

2、每天堅持做仰臥起坐。減肥，是一個很漫長的事，其實也是一步一步的發(fā)展的，需要人去堅持，才會有效果。仰臥起坐是最常見的一種鍛煉方式，簡單有效。我們可以早上起來，或者睡前，飯后一小時，堅持做上幾組仰臥起坐，每天能堅持養(yǎng)成鍛煉的好習(xí)慣，減肥就不是難事了。

3、堅持去健身房。相比較很多散練的運動減肥方法，可能效果不太明顯，這時候如果有一定的條件的話，可以選擇去專業(yè)的健身房，哪里有專業(yè)的器材，還有專業(yè)的教練，對于你個人的減肥，可以給出很好的計劃，能讓你快速減肥，達(dá)到好的效果。

4、堅持做平板支撐。減肥的方法有很多種，除了仰臥起坐，俯臥撐，平板支撐也是最常見的一種鍛煉方法，無需借助其他器材，只需要瑜伽墊，簡單方便。剛開始可以設(shè)定短一點的時間，后來可以慢慢加長訓(xùn)練的時間，不斷地鍛煉自己，堅持下去，對減肥一定會有效果。

（來源：文章屋網(wǎng) ）

第6篇

第1招：像寶寶一樣愛玩

寶寶們都喜歡在床上、地板上爬著到處轉(zhuǎn)，當(dāng)他們爬行時，他們的腹部和背部肌肉在用勁，這些核心肌肉對干訓(xùn)練他們爬行和坐立是非常重要的。媽媽們也要將注意力集中在這些肌肉上。 “訓(xùn)練核心肌肉非常重要，但就像做伸展運動一樣。盡管效果不是十分明顯，但不要因為這樣就忽視它，強壯的核心肌肉可以讓你在日常活動中擁有更好的控制力和輔助力?！报D位健身房高級私人教練這樣說。

這樣做同樣會使你變得更強壯，以便能參加更多的運動。寶寶在玩耍的時候，媽媽可以學(xué)著跟寶寶一起運動，跟寶寶一起玩捉迷藏，也可以自己做些簡單的健身操、瑜伽操等等。

第2招：像寶寶一樣吃

說到和寶寶一樣吃，我們大多數(shù)成人也許會不以為然，腦海里浮現(xiàn)的是寶寶吃東西時在頭發(fā)或者臉上都沾滿食物的畫面。實際上，像寶寶一樣吃飯也是減肥的重要因素。

①像寶寶一樣每隔3―4小時吃點小點心，可以使你保持充足的精力。美國體育醫(yī)學(xué)院的學(xué)者發(fā)現(xiàn)整天都在攝入食物的運動員的脂肪比那些在正統(tǒng)吃飯時間消耗他們所有卡路里的人更少。

②像寶寶一樣在飽了以后就停止進(jìn)食，不管你面前還留對于小媽們來說，有什么比小寶寶胖乎乎的小臉蛋和肉嘟嘟的小胳膊小腿更讓人喜歡的呢!然而，對于自己身上的贅肉，媽媽們卻苦惱不已。兒科醫(yī)生說：寶寶開始學(xué)會爬行時，它的嬰兒肥就開始慢慢減少了。那么，他們的媽媽呢?因為懷孕生產(chǎn)而增力0的體重也會慢慢自然減少嗎?――答案是否定的。但，也許我們也可以從寶寶身上學(xué)幾招減肥秘技：著多少美食――這對于控制食量是非常值得借鑒的。

③像寶寶一樣選擇多樣化的食物。在你的食物里加入給寶寶吃的食物，比如說南瓜、青豆、牛肉、米飯、香蕉和梨等等。參與選擇寶寶食譜意味著你攝入了更多的水果和蔬菜，飲食也變得更健康。

第3招：像寶寶一樣睡

寶寶的睡眠時間大約在12-15個小時，這個時間對于我們成人來說是非常奢侈的。在你的減肥計劃中，充足的睡眠往往可能是被忽略的環(huán)節(jié)。最近的研究顯示：缺乏睡眠會影響人體的荷爾蒙水平，從而增加人體的饑餓感并減慢新陳代謝速度。所以，在你累了或者困了的時候，適當(dāng)?shù)男菹⑹欠浅Ｃ髦堑倪x擇。

第4招：像寶寶一樣看電視

電視真的對你的寶寶有好處嗎?醫(yī)學(xué)研究表明：長時間看電視的寶寶可能導(dǎo)致體質(zhì)指數(shù)增高。那么，對于喜愛看電視的媽媽來說，這又意味著什么呢?醫(yī)學(xué)研究者最近發(fā)現(xiàn)：看電視的時候，一個人的新陳代謝實際上比他在休息的時候要慢。那就意味著你睡覺時比你早起看早間節(jié)目能燃燒更多的卡路里。美國育兒專家建議寶寶的前兩年時間里最好沒有電視。也許媽媽也應(yīng)該如此。

如果你已經(jīng)打開了電視，那么轉(zhuǎn)個頭，看看你的寶寶，他是如何看電視的。寶寶在看有強節(jié)奏感音樂伴奏的節(jié)目時，會拍手、蹦跳或者跳舞。換句話說，看電視并不是讓你自己懶洋洋地窩在沙發(fā)里或者床上，而是把電視當(dāng)作你保持運動的一種背景，你可以在家里的地板上散步，可以舉舉啞鈴或者做回你的老本行――家務(wù)活。

第5招：像寶寶一樣喝牛奶

寶寶最喜歡白色飲料了，不管它是配方奶粉、牛奶或者是來自媽媽的母乳，奶類食品可以給寶寶提供充足的鈣。同樣，媽媽每天也需要補充一定量的鈣，尤其是還處在哺乳期的媽媽。但是，媽媽們還是心存疑慮：奶制品能減肥嗎?答案是肯定的。

最近的研究已經(jīng)顯示：含鈣量豐富的奶制品可以增強機體燃燒脂肪的能力，并加快新陳代謝。美國田納西州大學(xué)教授MICHAELB．ZEMEL博士研究發(fā)現(xiàn)：富含奶制品的飲食習(xí)慣，再加上適當(dāng)?shù)倪\動，可以加快減少體重的過程。ZEMEL博士的其中一項研究表明：經(jīng)常食用低脂酸奶的人腹部減少的體重是不食用酸奶的人的3倍。

奶制品能減少腹部脂肪的確切原因仍待考證，但ZEMEL博士相信當(dāng)人體攝入奶制品時，必定會發(fā)生某種荷爾蒙反應(yīng)，導(dǎo)致腹部的脂肪細(xì)胞運動。所以，專家建議：當(dāng)媽媽們一方面擔(dān)心她們的飲食習(xí)慣是否健康，另一方面又擔(dān)心她們的形體，她們要做的第一件事就是開始每天喝牛奶。

第6招：像寶寶一枯多多運動

盡管寶寶可能只有你膝蓋那么點高，但他們會有某些激烈運動，也就是說經(jīng)常會有短時期的能量暴發(fā)，這對手媽媽的減肥計劃也有益處。研究表明短時間的激烈運動的效果和在健身房里泡上兩個小時的作用是一樣的。只要你的心跳達(dá)到每分鐘40－60下，就意味著你身體的脂肪在燃燒了。除此之外，即使你結(jié)束了某種激烈運動，你的身體也會繼續(xù)燃燒脂肪，這種現(xiàn)象我們稱之為后燃燒。

所以，媽媽們，每天都嘗試一種新的運動吧。去健身房的時候，可以不斷地更換你參力口的項目，從器械到健身操，從健身操到芭蕾，再從芭蕾舞回到器械運動，如此不斷的循環(huán)往復(fù)。當(dāng)然，運動不僅僅只局限在健身房，帶上你的寶寶，推個小車逛超市、商場，空的時候自己跳躍幾下都是健康且經(jīng)濟的選擇。

第7篇

一份新出爐的減重調(diào)查報告發(fā)現(xiàn)，81％的男性受訪者自覺減重有助體能表現(xiàn)，其中更有半數(shù)以上認(rèn)為有助提高次數(shù)與腰肌力量。 女性受訪者則有72％認(rèn)為減肥有助外在魅力，四成三表示有助次數(shù)、三成覺得有助。

一天當(dāng)中，有N個會要開，哪里有時間安靜下來享受美味。

一般中午的時候，我都會在麥當(dāng)勞、肯德基買個漢堡充饑。晚上，下班都很晚，路上包里隨時準(zhǔn)備的小零食已經(jīng)把我喂個半飽?；氐郊?，豐盛的晚餐讓我食欲大開。這些天，我發(fā)現(xiàn)我的體重明顯上漲了，腰部贅肉已經(jīng)現(xiàn)身了。我是該減肥了。

老公：任珂29歲部門主管老婆差不多，早餐對我來說就是一大杯果汁和一杯黑咖啡就OK了。辦公室的抽屜里的糖，餅干隨時防止肚子唱空城計。純凈水是我平時主要的飲料。

中午，我?guī)缀醵际窃趯懽謽窍碌牟蛷d吃點快餐，無非都是米飯炒菜之類的東西，比較油膩。

由于老婆下班比較晚，為了等她共進(jìn)晚餐，我通常在晚飯前會先吃點餅干或火腿腸，再喝點威士忌，以撫慰我的“五臟廟”。我們的晚餐是比較豐盛的，都是我們愛吃的紅燒排骨、水煮牛肉之類的菜。飯后，我倆還會邊看電視，邊吃點小零食。

常會喝一杯鮮果汁或者豆?jié){

由于中午時間比較緊張，午餐基本都是在飯館吃。那里的飯菜比較油膩，好像都是從油里泡出來似的。盡管我知道這對減肥很不利，可美味的誘惑實在太大了。我很喜歡吃水果，也喜歡吃零食，餅干、蜜餞、薯片……來者不拒。

我們倆決定一起減肥。等到目標(biāo)一達(dá)成，我的第一件事，就是把不敢穿的緊身衣服一次買齊，出門秀身材。

這已經(jīng)養(yǎng)成習(xí)慣了。

中午，會去同一家餐館用餐，吃一些蔬菜、肉類搭配均勻的工作餐。我不太喜歡吃水果。為了自己的健康，我打算減重5公斤。

雙人健身一起變瘦

兩個人一起健身，給你帶來的收獲遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出你的想象!

首先，兩個愛侶一起瘦身會讓減肥不再是難以堅持的苦差事。兩個人可以相互鼓勵，相互督促，一方泄氣了，動搖了，另一方可以在一旁幫忙打氣。其次，有個人在旁邊看著，你的錯誤動作就會無處藏身，避免了很多“無用功”。兩人瘦身成功后，上街時的那份良好感覺是不言而喻的。減肥也和休閑一樣，兩個人總比一個人樂趣多。

第8篇

3年前，在一個朋友的鼓勵下，Natalie 走進(jìn)了當(dāng)?shù)氐慕∩矸俊Ｔ诿绹的说铱酥菟固垢５碌腟portsplex健身俱樂部，她報名參加了超級減肥項目，這是一個8周的密集減肥計劃，它包含為會員尋求甩掉贅肉的健康和營養(yǎng)方面的咨詢。

Gianesello說：“我很擔(dān)憂，自己并不是一個積極主動的人，更不是那種一下班就會去健身房的人?！彪m然對她來說健身俱樂部中很多事物都是新鮮的，但Gianesello很快就適應(yīng)了?！霸谀菢拥沫h(huán)境中，與志同道合的人一起運動，我感到很舒服，”經(jīng)過8周的超級減肥項目，她減掉了約14鎊，并在項目結(jié)束后向更高的目標(biāo)前進(jìn)——首先聘請私人教練為她定制一個健康規(guī)劃，然后報一個訓(xùn)練營課程并在幾周內(nèi)的工作之余完成它?！白罱K，我從169鎊減到129鎊，”Gianesello說道，“這不僅僅只是數(shù)字問題，我已經(jīng)迷上了健身！”

興趣的吸引力

雖然成功減重，但是Gianesello對運動的熱誠并沒有減少。她的教練提醒她，個性能幫助她更快更好的成為一個健美教練。“我非常感激他的這番話，但我認(rèn)為他只是在說笑而已?！彼f道，“經(jīng)過另外幾次訓(xùn)練后，他讓我去教班上的一個學(xué)生。然而我發(fā)現(xiàn)他是對的：我喜歡當(dāng)教練?！盙ianesello開始為取得證書而奮斗。在此過程中，她學(xué)習(xí)了如何幫助別人保持健康這類非常寶貴的課程。她說道，“我曾經(jīng)逃避參加那些集體健身課程，一走進(jìn)教室，站在那些如電影中走出來的苗條女人旁邊，使我完全失去了自信心?！?/p>

正在她努力將自己的體形變得更完美時，她突然醒悟：“我意識到無論她們的體形如何，在上課時她們的注意力都完全集中在自己身上，這使我減少了很多壓力。”Gianesello也了解到緩慢而穩(wěn)定的運動效果更佳。那些保持健身的人比剛剛開始的人更強壯，但這需要你投入時間，日復(fù)一日的練習(xí)，無論你的技巧是否純熟，都能獲得最大的收獲。她說，“作為一個教練，我見過各種運動程度的人，每個人都在努力達(dá)到自己最好狀態(tài)?！?/p>

他們都有一個共同點：對小小的額外鼓勵的感激?！白罱?，我在等待一個客戶展示她的課程，但是她遲到了，”Gianesello說道，“我打電話給她想知道發(fā)生了什么，結(jié)果她說她在家里，耽擱了。她說，‘你可以過來對我進(jìn)行測試。我來不了了?！艺f，‘不行，我這里的健身球、啞鈴和所有的東西，都準(zhǔn)備好了。只要來半個小時就可以了。’”客戶勉強答應(yīng)來上了一節(jié)30分鐘的課程。最終，她非常感激Gianesello堅持的勸說。“她承認(rèn)，出門運動總比呆在家里吃垃圾食品、自暴自棄好得多。我喜歡這句，‘當(dāng)然，你可以做到！’”

堅持到底：諷刺的是，雖然她已經(jīng)是一個持照教練，要保持自己的健身水準(zhǔn)卻比把它當(dāng)成一種業(yè)余愛好更具困難。Gianesello說“我每天都過得很充實，上午9點我有一個客戶，11點又有另外一個。在兩個客戶之間，我會擠一點時間出來鍛煉一下。”她像激勵別人一樣鼓勵自己：花時間欣賞自己手臂的曲線，和跑步鍛煉出來的肌肉，這也是她最喜歡的有氧運動。